小鼠糖皮質(zhì)激素受體β(GR-β)elisa試劑盒代測(cè)等上海潤(rùn)裕生物科技有限公司ELISA試劑盒(酶聯(lián)免疫分析試劑盒)人、大鼠、小鼠、豚鼠、牛、豬、犬、馬、雞等各種ELISA試劑盒及各種動(dòng)物的血清和各種抗原抗體,產(chǎn)品種類(lèi)繁多、貨物齊全,效果穩(wěn)定、靈敏度高、特異性強(qiáng),免費(fèi)提供代測(cè)服務(wù)。電子版ELISA試劑盒(酶聯(lián)免疫分析試劑盒)說(shuō)明書(shū)免費(fèi)贈(zèng)送,且免費(fèi)提供產(chǎn)品報(bào)價(jià)、用途、規(guī)格等方面的咨詢(xún)。如有需要我們將竭誠(chéng)為您服務(wù)!
潤(rùn)裕生物小鼠糖皮質(zhì)激素受體β(GR-β)elisa試劑盒代測(cè)等ELISA試劑盒產(chǎn)品常見(jiàn)技術(shù)指南:
1、選擇抗體時(shí)選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對(duì);若選擇兩個(gè)單抗,必須識(shí)別不同表位的抗體;從同一家公司選擇抗體對(duì)。
2、ELISA實(shí)驗(yàn)中為了確定好的信號(hào)和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測(cè)抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí),應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說(shuō)明書(shū)常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。
3、標(biāo)準(zhǔn)品的配制:對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū),注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前,瞬時(shí)離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說(shuō)明書(shū)中的細(xì)節(jié),將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
4、一般待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過(guò)將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml??衫脴?biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類(lèi)試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
5、為了優(yōu)化靈敏度,建議過(guò)夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。
6、若使用過(guò)氧化物酶作為顯色系統(tǒng),應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過(guò)氧化物酶的活性。
7、當(dāng)測(cè)定混合液體中的抗原時(shí),如血清,建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig。
目前市場(chǎng)上,小鼠糖皮質(zhì)激素受體β(GR-β)elisa試劑盒代測(cè)等ELISA試劑盒產(chǎn)品既有國(guó)產(chǎn)也有進(jìn)口,數(shù)量繁多令人目不暇接,怎樣才能選出zui適用的產(chǎn)品呢?首先當(dāng)然得根據(jù)我們所要檢測(cè)的分子進(jìn)行檢測(cè),除此以外也還有一些需要加以考量的因素。
1. 抗體類(lèi)型
單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA,實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合效果更好。例如,對(duì)于雙抗夾心法而言,用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測(cè)有時(shí)更有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原,隨后單抗再特異性檢測(cè)擁有特定抗原表位的抗原。
雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢測(cè)抗體(不論多抗還是單抗)的配對(duì)很有講究。我們不希望捕獲抗體與檢測(cè)抗體競(jìng)爭(zhēng)抗原上的同一位點(diǎn),為此我們就需要確保捕獲抗體和檢測(cè)抗體所識(shí)別的抗原表位不存在重疊。如果捕獲抗體和檢測(cè)抗體之間發(fā)生了沖突,就會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生較大影響。要避免這一問(wèn)題,我們可以選擇購(gòu)買(mǎi)“matched pair”的捕獲/檢測(cè)抗體對(duì),這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過(guò)驗(yàn)證才*的好組合。
2. 實(shí)驗(yàn)類(lèi)型
ELISA試劑盒有多種類(lèi)型,不過(guò)它們都有一個(gè)共同特點(diǎn),就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cell ELISA和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISPOT是兩種特殊的類(lèi)型,In-cell ELISA需要將微孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化,然后再用抗體原位檢測(cè)。ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Western blot,先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,然后在膜上檢測(cè)細(xì)胞分泌的抗原形成斑點(diǎn)。此外,還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)。
通常人們使用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn),雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測(cè)抗體之間,這種方法既靈敏又有效,受到了許多研究者的青睞。不過(guò)有時(shí)候雙抗夾心法并不是通用的選擇,例如有時(shí)候抗原特別小讓兩個(gè)大抗體難以附著,又或者抗體只有一個(gè)抗體結(jié)合位點(diǎn)。在上述情況下,競(jìng)爭(zhēng)性ELISA就更為適用,這種方法是采用帶標(biāo)記的純化抗原與樣本中無(wú)標(biāo)記的抗原進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng),以結(jié)合捕獲抗體。
3. 檢測(cè)方式
如今檢測(cè)ELISA有許多途徑,我們可以根據(jù)自己的偏好進(jìn)行選擇。一般ELISA檢測(cè)的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物,抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶(例如通常使用的辣根過(guò)氧化物酶HRP),而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物(如3,3-二氨基聯(lián)苯胺DAB)。這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色,可以通過(guò)分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè),堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結(jié)合在一抗上,也可以結(jié)合在二抗上,還可以使用鏈霉親和素標(biāo)記的酶與親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合。此外ELISA的結(jié)果檢測(cè)還包括放射性檢測(cè)、熒光檢測(cè)、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測(cè)等。
4. 交叉反應(yīng)
如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)就會(huì)影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的特異性。其中抗體來(lái)源所帶來(lái)的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個(gè)因素。盡管現(xiàn)在購(gòu)買(mǎi)源自動(dòng)物的抗體越來(lái)越容易,我們?nèi)杂斜匾_認(rèn)一下是否會(huì)產(chǎn)生交叉反應(yīng)的問(wèn)題。在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA檢測(cè)時(shí),檢測(cè)用的二抗必須特異性針對(duì)檢測(cè)一抗,而不能與捕獲抗體起反應(yīng)。如果檢測(cè)用二抗與捕獲抗體結(jié)合,實(shí)驗(yàn)特異性就會(huì)大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測(cè)一抗,來(lái)避免上述問(wèn)題。與此同時(shí),了解試劑盒中提供的buffer也是有必要的(例如washing buffer和blocking buffer),以免這些buffer含有可能影響抗原抗體相互作用的組分,使檢測(cè)結(jié)果收到影響。
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小鼠糖皮質(zhì)激素受體β(GR-β)elisa試劑盒代測(cè)等ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù),現(xiàn)國(guó)內(nèi)眾多科研單位與我司合作,我們列舉部分國(guó)內(nèi)科研單位:清華大學(xué)、江蘇人民醫(yī)院、廣州醫(yī)科大學(xué)、中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)、蘭州大學(xué)、江蘇省南通市腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所、成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院、軍事醫(yī)學(xué)*、福建農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院、*疾病預(yù)防控制所、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)、南京大學(xué)、上海大學(xué),廣東醫(yī)學(xué)院等等國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室單位。