貨號(hào)：WT-E4899【抗微粒體抗體(Microsomal)ELISA試劑盒操作步驟】ELISA試劑盒方法類型和操作步驟
ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：① 固相的抗原或抗體，② 酶標(biāo)記的抗原或抗體，③ 酶作用的底物，根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)的條件，可設(shè)計(jì)出各種不
同類型的檢測(cè)方法。
【抗微粒體抗體(Microsomal)ELISA試劑盒操作步驟】 (一)雙抗體夾心法：
雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原zui常用的方法，操作步驟如下：
(1)將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
(2)加受檢標(biāo)本：使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間，讓標(biāo)本中的抗原與同相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。
(3)加酶標(biāo)抗體：使同相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。
(4)加底物：酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量。
根據(jù)同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物，即可雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中的抗體。
【抗微粒體抗體(Microsomal)ELISA試劑盒操作步驟】 (二)雙位點(diǎn)一步法：
在雙抗體夾心法測(cè)定抗原時(shí)，如應(yīng)用針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體，則在測(cè)定時(shí)可使標(biāo)本的加入和酶標(biāo)抗體的加入兩步并作一步。這種雙位點(diǎn)一步法不但簡(jiǎn)化了操作，
縮短了反應(yīng)時(shí)間，如果使用高親和力的單克隆抗體，測(cè)定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應(yīng)用使測(cè)定抗原的ELISA提高到新水平。
在一步法測(cè)定中，應(yīng)注意鉤狀效應(yīng)(hook effect)，類同于沉淀反應(yīng)中抗原過(guò)剩的后滯現(xiàn)象。當(dāng)標(biāo)本中待測(cè)抗原濃度相當(dāng)高時(shí)，過(guò)量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合，而不再形成夾心復(fù)合物，所得結(jié)果將低于實(shí)際含量。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
【抗微粒體抗體(Microsomal)ELISA試劑盒操作步驟】 (三)間接法測(cè)抗體 ：
間接法是檢測(cè)抗體時(shí)zui常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的抗-抗體檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體。故稱為間接法。操作步驟如下：
(1)將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。
(2)加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合，在洗滌過(guò)程中被洗去。
(3)加酶標(biāo)抗抗體：與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合，從而使該抗體間接地標(biāo)記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如： 欲測(cè)人對(duì)某種疾病的抗體，可用酶標(biāo)羊抗人lgG抗體。
(4)加底物顯色：顏色深度代表標(biāo)本中受檢抗體的量。
本法只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標(biāo)抗抗體檢測(cè)各種與抗原相應(yīng)的抗體。
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