人血管內(nèi)皮細胞生長因子-C ELISA 試劑盒
規(guī)格： 96T
檢測范圍： 62.5pg/ml→4000pg/ml
敏感性： ＜2pg/ml
特異性： 系統(tǒng)和其它細胞因子無交叉反應。
保存： 2-8℃（頻繁使用時）；-20℃（長時間不用時）。
有效期： 6 個月(4℃)；12 個月（-20℃）。
用途： 用于體外定量分析人血清、血漿、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清。
人血管內(nèi)皮細胞生長因子-C ELISA 試劑盒工作原理
血管內(nèi)皮細胞生長因子-C（VEGF-C）是zui重要的血管生長因子之一，屬于 VEGF 家族，該家族
包括 VEGF-A，B，C，D，E。VEGFR2 和 VEGFR3 都是其受體。體內(nèi)很多組織都能表達 VEGF-C，
zui多的是淋巴結(jié)、心、胎盤、小腸等。VEGF-C 對淋巴管和血管都能發(fā)揮作用。本試劑盒采用重
組人 VEGF-C 作為標準品，表達從 thr103—Arg227 計 135 個氨基酸，糖化后分子量 23KDa。
所提供的人 VEGF-C ELISA Kit 是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（Enzyme
Linked-Immuno-Sorbent Assay, ELISA）。預先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體為單克隆抗
體，克隆號 193208，經(jīng)生物素（biotin）標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后，
PBS 或 TBS 洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親和素反應；經(jīng)過 PBS 或 TBS 的*洗滌后用底
物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏
色的深淺和樣品中的人 VEGF-C 呈正相關(guān)。
內(nèi)容 | 規(guī)格 | 數(shù)量 |
預包被抗VEGF-C 抗體的 96 孔板 | 96T | 1 |
凍干標準品 | 10ng/管 | 2 |
生物素標記 | 130ul | 1 |
親和素-過氧化物酶復合物 | 130ul | 1 |
樣品稀釋液 | 30ml | 1 |
抗體稀釋液 | 12ml | 1 |
ABC 稀釋液 | 12ml | 1 |
TMB 顯色液 | 10ml | 1 |
TMB 終止液 | 10ml | 1 |
洗滌緩沖液(25X) | 20ml | 1 |
封板膜 |
| 2 |
說明書 |
| 1 |
需要而未提供的試劑和器材
1. 標準規(guī)格酶標儀。
2. 自動洗板機。
3. 恒溫箱
4. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器。
5. 干凈的試管和 Eppendof 管。
6. 用去離子水將 25X 洗滌緩沖液稀釋 25 倍，成 1X 洗滌緩沖液。
注意事項
1． 使用前 TMB 顯色液應為無色透明溶液，若發(fā)現(xiàn)顏色異常，請及時與廠家。
2． 用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
3 要嚴格避免操作過程中酶標板干燥。干燥會使酶標板上生物成份迅速失活。
4． 為免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和試管。
5． 禁止混用不同批次試劑盒內(nèi)的試劑。
6. 本公司提供的 96 孔酶標板是單條可拆型酶標板，用戶可按需求使用；剩余的酶標板請
按保存條件貯存。
7. 揭封板膜和覆蓋封板膜時應避免用力過大導致液體濺出。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將 1X 洗滌緩沖液至少 300ul 注入孔內(nèi)，浸泡 1-2 分鐘。根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
樣品的準備和保存
樣品如果不立即分析，應分裝后冷凍保存，且避免反復凍融。
細胞培養(yǎng)上清——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
血清——用干凈試管收集血液，室溫凝固 30 分鐘，離心 1500×g 15 分鐘，收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
血漿—在冰塊上收集肝素或 EDTA 抗凝血，抽血后 30 分鐘內(nèi)離心 1500×g 15 分鐘。血漿在 2-8℃進一步離心 10000×g 10 分鐘，以*清除血小板。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
細胞裂解液——對于貼壁細胞，去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液，用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。通常 10 秒后，細胞就會被裂解。對于懸浮細胞，離心收集細胞，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液，用槍吹打把細胞吹散，用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后，10000—14000g 離心 3-5 分鐘，取上清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
樣品稀釋的一般原則
用戶須估計樣品待測因子的含量，決定適當?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA 試劑盒的*檢測范圍。根據(jù)待測因子含量高、中、低的不同，分別采取不同的
稀釋方案：
高——指待測因子在 20-200ng/ml。一般按 1：100 稀釋。297ul 樣品稀釋液加 3ul 樣品。
中——指待測因子在 2-20ng/ml。一般按 1：10 稀釋。225ul 樣品稀釋液加 25ul 樣品。
低——指待測因子在 31.2-2000pg/ml。按 1：2 稀釋。100ul 樣品稀釋液加 100ul 樣品。
特低——指待測因子≤31.2pg/ml。樣品一般不做稀釋，或按 1：2 稀釋。
操作程序總結(jié)：
1． 加樣品和標準品，37℃反應 90 分鐘。不洗。
2． 加生物素標記抗體，37℃反應 60 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 3 次。
3． 加 ABC，37℃反應 30 分鐘。1X 洗滌緩沖液洗滌 5 次。
4． TMB37℃反應 15-20 分鐘。
5． 加入 TMB 終止液，讀數(shù)。
大鼠 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子 CRF corticotropin-releasing factor
大鼠 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子受體1 CRFR1 corticotropin-releasing factor Receptor 1
大鼠 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子受體2 CRFR2 corticotropin-releasing factor Receptor 2
大鼠 促生長激素釋放激素 GHRH growth hormone releasing hormone
大鼠 促性腺激素釋放激素 GnRH gonadotropin-releasing hormone
大鼠 促胰島素分泌肽 Exendin-4 Exendin-4
大鼠 促胰液素 secretin secretin
大鼠 催產(chǎn)素 OT oxytocin
大鼠 催乳素 PRL prolactin
大鼠 大內(nèi)皮素 Big ET Big Endothelin
