苯并芘DNA加合物ELISA試劑盒的試劑準(zhǔn)備:
1.標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備,不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:
500pg/ml | (6號標(biāo)準(zhǔn)品) | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul |
250pg/ml | (5號標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
125pg/ml | (4號標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
62.5pg/ml | (3號標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
31.2pg/ml | (2號標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
15.6pg/ml | (1號標(biāo)準(zhǔn)品) | 100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
0pg/ml | (空白對照) | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul |
2.洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。
苯并芘DNA加合物ELISA試劑盒的操作流程:
1.在各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品各100μL,37℃孵育90分鐘;
2.加入100μL 生物素化抗體工作液,37℃孵育60分鐘;
3.洗滌3次;
4.加入100μL酶結(jié)合物工作液,37℃孵育30分鐘;
5.洗滌5次;
6.加入90μL底物溶液,37℃孵育15分鐘左右;
7.加入50μL終止液,立即在450nm波長處測量OD值;
8.結(jié)果計算。
苯并芘DNA加合物ELISA試劑盒的結(jié)果判斷與分析:
1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的LAM標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的LAM含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度,再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
3、檢測值范圍:0-480ng/ml
4、敏感度:0.1ng/ml