C肽放免試劑盒,科研專用
C肽(C-Peptide)又稱連接肽,由胰島β細(xì)胞分泌,它與胰島素有一個共同的前體胰島素原。
[用途]及檢測意義 1) 指導(dǎo)胰島素治療,C 肽測定可以確定是否繼續(xù)使用胰島素治 療,還是用口服降糖藥或飲食治療。C 肽的測定值對糖尿病具有重要意義。 2) 對低血糖綜合癥的診斷。 3) 對胰島移植和胰腺移植的樣本,C 肽測定可以了解移植是否存活和 B 細(xì)胞的功能。 4) 同時測定 C 肽和胰島素可了解肝病的變化,如肝硬化時,外周血 C 肽/胰島素的比值下 降。
[試驗(yàn)原理] ,通過二抗沉淀抗原-抗體免疫復(fù)合物來測定血清中 C 肽的含量,待測血清、標(biāo)準(zhǔn)品中的 C 肽和 125I-C–P 與有*的抗體競爭結(jié)合。125I-C–P 一 部分與抗體結(jié)合為復(fù)合物,另一部分游離。加入分離試劑,離心使復(fù)合物部分沉淀,與游離 部分分離,棄去上清液,測定沉淀物的放射性計數(shù)。待測血清和標(biāo)準(zhǔn)中的 C 肽含量與與復(fù)合 物的放射性強(qiáng)度呈負(fù)相關(guān),用一系列不同濃度的 C 肽作標(biāo)準(zhǔn),可獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線,從標(biāo)準(zhǔn)曲線 上可查出血清中 C 肽的含量。
[注意事項(xiàng)] 1) 收到分析試劑盒后,盡快存放在 2 – 8℃。 2) 由于 C 肽在溶液狀態(tài)下極不穩(wěn)定,所以先溶解標(biāo)記物、抗體,待一切準(zhǔn)備工作完畢后, 后溶解標(biāo)準(zhǔn)品。如果分析試劑盒一次用不完,要做若干次,那么把標(biāo)準(zhǔn)品溶解后盡快 分裝成若干份,并立即存放在–20℃保存,避免反復(fù)凍融。C 肽標(biāo)記物的分裝、使用、 保存同標(biāo)準(zhǔn)品程序,避免反復(fù)凍融。 3) 在加分離試劑前,將分離試劑搖勻。 4) 分析試管放在 4℃溫育時,好套上塑料袋,避免蒸發(fā),保持一定的反應(yīng)體積。
[實(shí)驗(yàn)方法] 1、 將實(shí)驗(yàn)所需試劑及樣本放置室溫,凍干品按操作要求進(jìn)行溶解,平衡至少 30 分鐘 以上才可進(jìn)行操作; 2、 取 60X12mm 聚苯乙烯管進(jìn)行編號,所有實(shí)驗(yàn)均做雙管重復(fù); 3、 每個 NSB 管加入 200µl 溫育液,每個標(biāo)準(zhǔn)品“0”管 加入 100µl 溫育液; 4、 取每個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品(A~F)、質(zhì)控血清和樣本 100µl 加入相應(yīng)編號的試管中; 5、 每管均各加入 100µl 標(biāo)記物工作液; 6、 除 T、NSB 管外,每管均各加入 100µl 抗體工作液,充分混勻; 7、 4℃溫育 24 小時; 8、 每管均各加入 500µl 分離劑后,充分混勻; 9、 室溫放置 15 分鐘后,離心 3500 轉(zhuǎn)/分,20 分鐘后,吸去或傾倒掉上清液; 10、 用 γ-計數(shù)器測定每管 1 分鐘的放射性強(qiáng)度計數(shù); 11、 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取樣本及質(zhì)控血清的濃度。
[實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)注意] 1、 γ-計數(shù)器本底計數(shù)應(yīng)≤100CPM/分,效率應(yīng)≥75%; 2、 加入放射性標(biāo)記物時,應(yīng)做好防護(hù)、小心謹(jǐn)慎,以避免造成放射性污染; 3、 如果某一個樣本的測定值高于ZUI高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品濃度,用零標(biāo)準(zhǔn)品以 1:2 或 1: 4 的比例稀釋樣本后重新測試,測試結(jié)果乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
[質(zhì)量控制] 每次實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)至少采用兩個濃度的質(zhì)控血清進(jìn)行質(zhì)量控制,以確保每次實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果 的可靠性。 1、 質(zhì)控血清的平均值應(yīng)在允許范圍內(nèi); 2、 曲線方程應(yīng)采用佳擬合方式; 3、 重復(fù)樣本的測定結(jié)果相差在 15%以內(nèi)。 如不能同時滿足以上條件,則此次試驗(yàn)結(jié)果無效,全部試驗(yàn)需重新進(jìn)行。
C肽放免試劑盒,科研專用
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