β-內(nèi)酰胺酶是一大類能夠水解β-內(nèi)酰胺的酶。β-內(nèi)酰胺環(huán)是所有β-內(nèi)酰胺抗生素(包括qingmeisu衍生物,toubaojunsu,單bactams和碳青霉烯)中的常見元素。通過水解,β-內(nèi)酰胺酶會破壞β-內(nèi)酰胺環(huán)的打開,從而使分子的抗菌性能失活。通過合成β-內(nèi)酰胺酶,來自臨床和非臨床環(huán)境的細(xì)菌對β-內(nèi)酰胺抗生素的耐藥性越來越高。為了克服這種耐藥性,通常將β-內(nèi)酰胺酶抑制劑(如克拉維酸)與β-內(nèi)酰胺類抗生素一起使用。因此,檢測β-內(nèi)酰胺酶活性對于評估β-內(nèi)酰胺類抗生素以及預(yù)防抗生素耐藥性至關(guān)重要。AAT Bioquest' 比色β-內(nèi)酰胺酶活性測定試劑盒提供了靈敏的比色測定法,用于測量生物樣品中的β-內(nèi)酰胺酶活性。使用Nitrocefin可以檢測到β-內(nèi)酰胺酶的活性,該酶在被β-內(nèi)酰胺酶水解后會從黃色變?yōu)榧t色??梢允褂梦舛扔嬅笜?biāo)儀通過測量490 nm至380 nm波長下的OD比率來執(zhí)行測定。
吸光度酶標(biāo)儀 | |
吸光度 | 490/380納米 |
推薦板 | 純白色 |
成分A:硝化丁香 | 1小瓶(100 µL) |
組分B:測定緩沖液 | 1瓶(10毫升) |
成分C:β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)品 | 1小瓶(凍干粉) |
準(zhǔn)備β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品(50 µL)
加入β-內(nèi)酰胺酶工作溶液(50 µL)
在室溫下孵育30-60分鐘
監(jiān)測OD比為490/380 nm時的吸光度增加
重要說明
開始實驗前,在室溫下解凍每個試劑盒成分的小瓶。
儲備溶液的制備
除非另有說明,否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣,制備后應(yīng)儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)儲備液(50 mU / mL):
將100 µL ddH 2 O加入小瓶β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)液(組分C)中,制成50 mU / mLβ-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)液。
配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
為了方便起見,請使用我們的系列稀釋計
向990 µL 1x PBS緩沖液中加入10 µL 50 mU / mLβ-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)溶液,以生成500 µU / mLβ-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)溶液(SD7)。取500 µU / mLβ-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)溶液(SD7),并在PBS中進(jìn)行1:2連續(xù)稀釋,以得到連續(xù)稀釋的β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)溶液(SD6-SD1)。注意:稀釋的β-內(nèi)酰胺酶標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定,應(yīng)立即使用。
準(zhǔn)備工作溶液
將50 µL硝苯丁酮原液(組分A)加入5 mL的測定緩沖液(組分B)中并充分混合,制成β-內(nèi)酰胺酶工作溶液。注意:此β-內(nèi)酰胺酶工作溶液足以用于一個96孔板。β-內(nèi)酰胺酶工作溶液不穩(wěn)定,每次使用都應(yīng)準(zhǔn)備新鮮。
12560 | BG-NH2 [O6-(4-氨甲基 - 芐基)niaopiaoling] | BG-NH2 [O6-(4-Aminomethyl-benzyl)guanine] | 1 mg |
12561 | BG-NH2 [O6-(4-氨甲基 - 芐基)niaopiaoling] | BG-NH2 [O6-(4-Aminomethyl-benzyl)guanine] | 5 mg |
12601 | Amplite™熒光法β-半乳糖苷酶檢測試劑盒 *綠色熒光* | Amplite™ Fluorimetric Beta-Galactosidase Assay Kit *Green Fluorescence* | 1 kit |