產(chǎn)品名稱 | PA-IgG/M/A檢測試劑盒 |
英文名稱 | Mouse platelet antibodies IgG/M/A, PA-IgG/M/A Elisa Kit |
貨號 | XG00M1873 |
?測定步驟:
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標本后和加結(jié)合物后,應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃,ELISA板可避光放在實驗臺上,以便 不時觀察,待對照管顯色適當時,即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟,但卻 是決定實驗成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺,在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標儀測定結(jié)果,準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質(zhì) 量和軟件的算法。
樣品收集、處理及保存方法:
1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
標本要求:
1. 血清::溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
3. 尿液:無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑,用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測過程中除正常反應(yīng)外,有時常見到一些錯誤的結(jié)果。引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:
①標本因素;
②試劑因素;
③操作因素。
下面就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析。
1.樣品稀釋 酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng),如果血清不稀釋,不可避免會產(chǎn)生很強的非特異性反應(yīng),出現(xiàn)假陽性。因此,國外檢測血清抗體的試劑盒,均規(guī)定將血清稀釋至適當?shù)谋稊?shù),以降低非特異性反應(yīng),使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來。一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗確定,以保證試驗的靈敏度和特異性。但是,有些用戶未能嚴格按使用說明書操作,如某些產(chǎn)品應(yīng)取10μl樣品進行稀釋,個別用戶取5μl甚至1μl樣品進行稀釋,由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠,因此造成樣品稀釋倍數(shù)不準確,檢測結(jié)果出現(xiàn)問題。
2.試劑盒平衡 試劑盒中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗前平衡至室溫(約25℃),一般需在室溫放置20~30分鐘以上。平衡時間太短會造成試劑混勻不夠,樣品孵育時間相對縮短,ELISA反應(yīng)不夠充分。冬季室溫低,可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。
3.樣品和試劑的混勻 稀釋前、后的樣品必須充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗的均一性。
下列是公司是正在的產(chǎn)品:
活性依賴性神經(jīng)保護因子(ADNP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Dexmedetomidinehydrochloride,alpha2agonist
活性氧物種調(diào)節(jié)因子1(ROMO1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Dobutaminehydrochloride,beta1andbeta2adrenoceptoragonist
活化T-細胞核因子2(NFATC2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Maprotilinehydrochloride,Noradrenalinereuptakeinhibitor
回腸脂肪結(jié)合蛋白(FABP6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Octopaminehydrochloride,beta3agonist:invertebratebiogenicamine
回腸脂肪結(jié)合蛋白(FABP6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Salmeterolxinafoate,beta2adrenoceptoragonist
恢復(fù)蛋白(RCVRN)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Salmeterolxinafoate,beta2adrenoceptoragonist
黃體激素(LH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)UK14,304tartrate,alpha2adrenergicagonist
黃體激素(LH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)R-(-)-alpha-Methylhistaminedihydrobromide,H3receptoragonist
黃體激素(LH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)CPPG,groupII/IIImetabotropicglutamatereceptorantagonist
黃體激素(LH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)CPPG,groupII/IIImetabotropicglutamatereceptorantagonist
黃嘌呤脫酶(XDH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Amthaminedihydrobromide,H2agonist
黃嘌呤脫酶(XDH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Amthaminedihydrobromide,H2agonist
黃嘌呤脫酶(XDH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Ciproxifanmaleate,prototypicH3inverseagonist/antagonist
黃嘌呤脫酶(XDH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Ciproxifanmaleate,prototypicH3inverseagonist/antagonist
緩激肽受體B2(BDKRB2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Clobenpropitdihydrobromide,H3antagonist
PA-IgG/M/A檢測試劑盒 鈉/交換因子1(NHE1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)HumanEG-VEGFELISAKit(PK1)
鈉/葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白5(SGLT5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)HumanBSGELISAKit(CD147)
鈉/葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白4(SGLT4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)MouseErythropoitinELISAKit(EPO)
鈉/葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白3(SGLT3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)MouseGalectin1ELISAKit
鈉/葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白2(SGLT2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)MouseKIM1ELISAKit(TIM-1)
鈉/葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白2(SGLT2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)RatKIM-1TIM-1ELISAKit
鈉/葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白1(SGLT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)HumanKallikrein1ELISAKit(KLK1)
鈉/葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白1(SGLT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)HumanLamininELISAKit
鈉/鉀離子轉(zhuǎn)運ATP酶β4肽(ATP1β4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)HumanLipocalin-2ELISAKit(NGAL)
鈉/鉀離子轉(zhuǎn)運ATP酶β4肽(ATP1β4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)MouseLipocalin-2ELISAKit(NGAL)
鈉/鉀離子轉(zhuǎn)運ATP酶β3肽(ATP1β3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)RatLipocalin-2ELISAKit(NGAL)
鈉/鉀離子轉(zhuǎn)運ATP酶β3肽(ATP1β3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)MouseLOX1ELISAKit(OLR1)
鈉/鉀離子轉(zhuǎn)運ATP酶β1肽(ATP1β1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)HumanMERELISAKit
鈉/鉀離子轉(zhuǎn)運ATP酶β1肽(ATP1β1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)HumanMyeloperoxidaseELISAKit(MPO)
鈉/鉀離子轉(zhuǎn)運ATP酶α2肽(ATP1α2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)HumanSurvivinELISAKit
實驗原理:
是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。