以下是細(xì)胞的訂購(gòu)信息：

英文簡(jiǎn)稱：CHO-K1細(xì)胞    

產(chǎn)品名稱：中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞；CHO-K1

規(guī)格：T25

形態(tài)特性：上皮樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

特征特性：1957年，PuckTT從成年中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢的活檢組織建立了CHO細(xì)胞，CHO-K1是CHO的一個(gè)亞克隆。CHO-K1的生長(zhǎng)需要。

培養(yǎng)條件：DMEM+10%FBS

傳代方法：1：2傳代

貨號(hào)：CS-X63210

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

注意事項(xiàng)：
（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞在對(duì)數(shù)生，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合，過(guò)密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好，而且消化時(shí)不容易分散；
（2）凍存的密度不宜過(guò)低，10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶?jī)鲆还埽?.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個(gè)細(xì)胞）分成兩管。
（3）消化和吹打，切忌消化過(guò)度，吹打不可太用力，不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。
（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格，我從10%-90%都用過(guò)，問(wèn)題不大，個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。
（5）關(guān)于“慢凍”，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長(zhǎng)，-80度過(guò)夜，最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室，使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。
噬相關(guān)基因AMBRA1抗體    AMBRA1抗體

脊髓小腦失調(diào)癥蛋白1抗體    ATXN1/Ataxin-1抗體

乙酰羧化酶抗體    Acetyl CoA Carboxylase抗體

細(xì)胞核重定位及紡錘體檢查點(diǎn)蛋白AMN1抗體    AMN1抗體

天連接糖基化11抗體    ALG11抗體

細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白ASF1A抗體    ASF1A抗體

氨基糖苷類磷酸結(jié)構(gòu)域蛋白抗體    AGPHD1抗體

唾液酸糖蛋白受體1抗體    ASGPR1抗體

芳香基硫酸酯酶F抗體    ARSF抗體

A激酶錨定蛋白5抗體    AKAP5抗體

小腦脊髓共濟(jì)失調(diào)蛋白3抗體    ATXN3L抗體

ASTE1蛋白抗體    ASTE1抗體

微絲相關(guān)蛋白1抗體    AFAP抗體

芳基硫酸酯酶B抗體    ARSB抗體

γ氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶抗體    ABAT抗體

共濟(jì)失調(diào)蛋白2結(jié)合蛋白1抗體    A2BP1抗體

腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)換酶    ADAM17抗體

芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白2抗體    ARNT2 抗體

AlkB同源蛋白8抗體    ABH8抗體

ABI基因家族成員3結(jié)合蛋白抗體    ABI3BP抗體

Rho GTP酶激活蛋白20抗體    ARHGAP20抗體

含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族10抗體    ASB10抗體

乙醛脫氫酶1蛋白家族L1抗體    ALDH1L1抗體

軸抑制蛋白2抗體    Axin 2抗體

血管生成素相關(guān)蛋白6抗體    ANGPTL6抗體

Muellerian繆勒管激素抑制因子抗體    AMH抗體

蛋白激酶受體A8抗體    EphA8抗體

脂肪酰家族成員1抗體    Acetoacetyl-CoA synthetase抗體

蛤弧菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒    Vibrio tapetis

創(chuàng)傷弧菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒    Vibrio vulnificus

田鼠痘病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒    Volepox Virus

多瘤病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒    Washington University Polyomavirus（WUPyV）WU

韋塞爾斯布朗病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒    Wesselsbron Virus

白斑綜合癥病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒    White Spot Syndrome Virus(WSSV)

高首鱘虹彩病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒    White Sturgeon Iridovirus(WSIV)

RT-(RT-)牛羚關(guān)聯(lián)惡性卡他熱病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒    Wildebeest-associated Malignant Catarrhal Fever Virus (WA-MCF)

沃爾巴克氏菌通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒    Wolbachia spp.

班氏絲蟲(chóng)探針?lè)晒舛縋CR試劑盒    Wuchereria bancrofti

加州立克次體探針?lè)晒舛縋CR試劑盒    Xenohaliotis californiensis

苛養(yǎng)木桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒    Xylella fastidiosa

木絲霉探針?lè)晒舛縋CR試劑盒    Xylohypha bantania

亞巴猴腫瘤病毒病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒    Yaba Monkey Tumor Virus(YMTV)

酵母菌屬通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒    Yeast

CHO-K1細(xì)胞小腸結(jié)腸炎耶爾森菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒    Yersinia enterocolitica

鼠疫耶爾森菌(鼠疫桿菌)探針?lè)晒舛縋CR試劑盒    Yersinia pestis

假結(jié)核耶爾森菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒    Yersinia pseudotuberculosis

魯氏耶爾森菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒    Yersinia ruckeri

耶爾森菌通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒    Yersinia spp.

副溶血性弧菌//三重探針?lè)晒舛縋CR試劑盒    toxR/tdh/trh

實(shí)驗(yàn)報(bào)告
一、產(chǎn)分離與培養(yǎng)：
   1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將成1mm3左右大??；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗（Abbioscience公司），然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗（嘉美生物公司）， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡(Leica公司)下觀察圖像并拍照。