產(chǎn)品僅用于科研原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱:微量DNA助沉劑
產(chǎn)品規(guī)格: 詳見說明
產(chǎn)品貨號(hào):BK-P96716
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè);
◇高通量:多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1. 使用化學(xué)修飾的熱啟動(dòng)聚合酶,反應(yīng)特異性高,*程度地避免了非特異擴(kuò)增;
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應(yīng)靈敏快速,40個(gè)循環(huán)只需20多分鐘;
3. 抗干擾能力強(qiáng),反應(yīng)重復(fù)性高,適合對(duì)土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進(jìn)行檢測(cè)分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
特異性熒光標(biāo)記:
TaqMan法
TaqMan探針的特性:
(1)5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)(Reporter, R),如FAM、VIC等
(2)3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) (Quencher, Q)
(3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ,無熒光, R與Q分開,發(fā)熒光
(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針
相對(duì)定量通過內(nèi)標(biāo)定量:
內(nèi)標(biāo)(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定,受環(huán)境因素影響小,內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括絕對(duì)定量和相對(duì)定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的絕對(duì)定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
溴代本 Bromobqnzqnq 108-86-1 HumanAndrogenBindingProtein,ABPELISAKit 人雄激素結(jié)合蛋白(ABP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
右旋糖苷/葡聚糖10Dextran-10質(zhì)量規(guī)格:M.W:10000 RatGranulocyteColonyStimulatingFactor,G-CSFELISAKit大鼠粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人抗環(huán)胍酸肽抗體(CCP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
甲磺酸齊拉西酮(標(biāo)準(zhǔn)品)Ziprasidone mesilate質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測(cè)定 B5固著液50毫升 小鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)試劑盒 Mouse Caveolin-1,CAV1 ELISA kit
鹽酸美利曲辛(標(biāo)準(zhǔn)品)Melitracen 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定 MouseIgGELISA試劑盒小鼠IgGELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 抑制素β-A(INHBA)ELISA試劑盒 ,英文名: INHBA ELISA Kit
咪唑斯?。?biāo)準(zhǔn)品)Mizolastine質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測(cè)定 小鼠水通道蛋白2(AQP-2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 Mouse17-Hydroxyprogesterone,17-OHPELISA試劑盒小鼠17羥孕同(17-OHP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
頭孢氨芐Cephalexin質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,一水合物 HumanCCAAT/enhancerbindingproteinalpha,C/EBPαELISAKit 人CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α(C/EBPα)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝 人類白細(xì)胞抗原A(HLA-A)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
氯普噻噸Chlorprothixene質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR ChickenLeinizingHormone,LHELISA試劑盒雞促黃體激素(LH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 小鼠破傷風(fēng)(Tetanus)抗體試劑盒 Mouse tetanus aibody ELISA kit
咪唑(標(biāo)準(zhǔn)品)Imidazole質(zhì)量規(guī)格:檢查 載玻片細(xì)胞NFKAPPABP50蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 主要穹窿蛋白(MVP)ELISA試劑盒 ,英文名: MVP ELISA Kit
瑞他帕林;瑞他莫林Retapamulin質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR MouseFreei-iodothyronineIndes,Free-T3ELISAKit小鼠游離狀腺原氨酸(Free-T3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T Humananspoerassociatedwithaigenprocessing,TAPELISA試劑盒人抗原提呈相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白/T細(xì)胞活化蛋白(TAP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
微量DNA助沉劑
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?/span>4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。