細(xì)胞內(nèi)NADH / NADPH流式細(xì)胞分析試劑盒是美國AAT Bioquest研發(fā)的，細(xì)胞內(nèi)二氫*腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的檢測對于疾病診斷和藥物發(fā)現(xiàn)是重要的。通常，氧化還原偶聯(lián)NAD / NADH和NADP / NADPH在能量代謝，糖酵解，三羧酸循環(huán)和線粒體呼吸中起關(guān)鍵作用。NAD（P）H水平升高與活性氧（ROS）和DNA損傷的異常產(chǎn)生有關(guān)。然而，由于缺乏敏感的NAD（P）H探針，檢測細(xì)胞內(nèi)NAD具有挑戰(zhàn)性。（P）H在生物系統(tǒng)中。該流式細(xì)胞分析試劑盒提供了一種監(jiān)測遠(yuǎn)光譜活細(xì)胞中細(xì)胞內(nèi)NAD（P）H水平的有效方法，可與其他應(yīng)用如GFP表達(dá)細(xì)胞或MitoTracker的應(yīng)用相結(jié)合。JJ1902 NAD（P）H探針是一種優(yōu)秀的熒光探針，用于檢測和成像細(xì)胞中的NADH / NADPH。該熒光探針結(jié)合NADH / NADPH，產(chǎn)生高靈敏度和特異性的強(qiáng)熒光信號。JJ1902 NAD（P）H探針可以很容易地加載到活細(xì)胞中，并且可以使用APC通道中的流式細(xì)胞儀方便地監(jiān)測其熒光信號。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的 細(xì)胞內(nèi)NADH / NADPH流式細(xì)胞分析試劑盒。
實(shí)驗(yàn)樣品示例
概述
1.準(zhǔn)備細(xì)胞（0.5 - 1×106細(xì)胞/ mL）
2.將含有測試化合物和JJ1902 NAD（P）H探針的細(xì)胞在37℃孵育20-30分鐘
3.將細(xì)胞洗凈并保持在測定緩沖液中
4.使用APC通道用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞
注意：在開始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。
操作方法
1.對于每個樣品，將細(xì)胞制備在0.5 mL無血清培養(yǎng)基或您選擇的緩沖液中，密度為1×105至1×106個細(xì)胞/ mL。
注意1：應(yīng)對每個細(xì)胞系進(jìn)行單獨(dú)測評，以確定佳細(xì)胞密度。 對于貼壁細(xì)胞，用0.5 mM EDTA輕輕提起細(xì)胞以保持細(xì)胞完整，并用無血清培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞一次。
注意2：JJ1902 NAD（P）H探針在血清存在的情況下也兼容。
2.將細(xì)胞與測試化合物在37℃孵育所需的一段時間以刺激細(xì)胞內(nèi)NADH / NADPH。
注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r間取決于單個細(xì)胞類型和使用的測試化合物。 優(yōu)化每個實(shí)驗(yàn)的孵育時間。
3.將1μL JJ1902NAD（P）H探針（組分A）加入0.5 mL細(xì)胞懸浮液中。在37℃下孵育30-60分鐘。
注意對于NADH / NADPH陽性對照處理：將Jurkat細(xì)胞與100μMNADH或NADPH在無血清培養(yǎng)基中孵育30分鐘，并與JJ1902 NAD（P）H探針工作溶液在37℃下共溫育30分鐘。
4.用所需的緩沖液（如HHBS或DPBS）洗滌細(xì)胞一次。將細(xì)胞保存在分析緩沖液（組分B）中。
5.使用流式細(xì)胞儀監(jiān)測APC通道的熒光強(qiáng)度。
