【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】
本試劑盒基于PCR技術(shù)，并適用于食品中EIEC的檢測(cè)。
【檢測(cè)原理】
利用2對(duì)特異性引物和PCR反應(yīng)所需其他試劑，如反應(yīng)緩沖液、dNTPs以及Taq DNA聚合酶等，加入待檢核酸樣品，即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。經(jīng)比對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物目標(biāo)條帶組合即可判定所對(duì)應(yīng)的致瀉大腸埃希氏菌類別。
【產(chǎn)品特點(diǎn)】
1.快速簡(jiǎn)便：將酶、引物等反應(yīng)組分混勻后進(jìn)行干粉化處理，增加試劑穩(wěn)定性，使用時(shí)減少溶液配制步驟，更為便捷，整個(gè)檢測(cè)反應(yīng)可在3 h內(nèi)完成；
2.特異性高：由GB 4789.6?2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)致瀉大腸埃希氏菌檢驗(yàn)》提供的目標(biāo)基因引物，保證擴(kuò)增反應(yīng)的高度特異性；
3.判讀簡(jiǎn)單：擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳和紫外儀觀察目標(biāo)條帶即可判別，直觀方便。
【產(chǎn)品組分】
編號(hào) | 組分名稱 | 規(guī)格×數(shù)量 |
-- | 干粉試劑EI | 8管×3排 |
-- | PCR復(fù)溶液 | 1 mL×1管 |
Y05 | 陽(yáng)性對(duì)照 | 1管（凍干型） |
| 陰性對(duì)照 | 1管（凍干型） |
| 裂解液 | 1 mL×1管 |
| 超純水 | 1 mL×1管 |
| 6×Loading buffer | 240μL×1管 |
| 說(shuō)明書 | 1份 |
【儲(chǔ)存條件與保質(zhì)期】
2~8℃條件下儲(chǔ)存，有效期為12個(gè)月。
【所需其他材料和適用儀器】
1.PCR儀器、高速離心機(jī)、電泳儀、水平電泳槽、紫外儀、移液器、移液槍頭及離心管等；
2.瓊脂糖、溴化乙錠（EB）或其他核酸染料。
【使用指南】
3.樣品前處理
1)參照GB 4789.6?2016，使用1 μL接種環(huán)刮取營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板或斜面上培養(yǎng)18 h~24h的菌落，懸浮到含30 μL裂解液的無(wú)菌離心管中，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱10 min；
2)12000 r/min離心15 min，上清即為粗提的DNA，可轉(zhuǎn)移至0.2 mL無(wú)菌離心管中，在-20℃下可長(zhǎng)期保存。
1. 加樣、反應(yīng)
1)使用時(shí)，分別加入80 μL超純水至陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照管中，充分溶解，-20℃存儲(chǔ)待用；
2)取出凍干粉試劑EI，按照需求剪取n個(gè)檢測(cè)試劑管（n=待檢測(cè)樣品數(shù)+1管陽(yáng)性對(duì)照+1管陰性對(duì)照），每管加入18 μL復(fù)溶液，充分溶解后待用；
3)向上述已加入復(fù)溶液的n個(gè)反應(yīng)管中分別加入待測(cè)樣品核酸、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各2 μL，緊蓋后置于PCR儀中按設(shè)定的反應(yīng)程序進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)；
4)PCR反應(yīng)程序如下：
2. 結(jié)果判讀
反應(yīng)后每管中加入4μL 6×Loading buffer，混勻，并取8 μL樣品經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳，在紫外儀下觀察，陰性對(duì)照僅有uidA條帶擴(kuò)增，陽(yáng)性對(duì)照中出現(xiàn)目標(biāo)條帶（參照?qǐng)D1），PCR試驗(yàn)結(jié)果成立。根據(jù)每個(gè)樣品對(duì)應(yīng)的凍干粉試劑EI反應(yīng)產(chǎn)生的目標(biāo)條帶種類，并查找該目標(biāo)條帶組合所對(duì)應(yīng)的致瀉大腸埃希氏菌類別（參照表1），即為檢測(cè)結(jié)果。若陰陽(yáng)性對(duì)照管反應(yīng)結(jié)果不符，則本次檢測(cè)結(jié)果無(wú)效，應(yīng)重新檢測(cè)或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。
