標(biāo)本要求:
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | TPS總蛋白SELISA試劑盒 |
英文名稱 | TPS ELISA Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 48T/96T |
產(chǎn)品貨號(hào) | LZ-E028514 |
需要而未提供的試劑和器材:
1. 產(chǎn)品僅用于科研標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
2. 高速離心機(jī)
3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱
4. 干凈的試管和Eppendof管
5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭,一次檢測(cè)樣品較多時(shí),用多通道移液器
6. 蒸餾水,容量瓶等。
備試劑與收集血樣:
1. 收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè), 2-8 ℃ 保存48 小時(shí);更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反復(fù)凍融。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管,管加標(biāo)本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對(duì)照。
3. 10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。
4. 洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)
檢測(cè)程序:
1. 加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向?yàn)V紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
操作步驟:
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
CC趨化因子受體1(CCR1)試劑盒白綿馬素AA3-氨-2-惡唑烷 分析標(biāo)準(zhǔn)品土貝母苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>95%
CC趨化因子受體1(CCR1)試劑盒白綿馬素AP抗壞血鈣 分析標(biāo)準(zhǔn)品高銨 AR
CX3C趨化因子受體1(CX3CR1)試劑盒白皮杉阿特拉津 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%大黃酚 97%
CX3C趨化因子受體1(CX3CR1)試劑盒白屈菜紅1-氨-5-萘酚 97%大黃素 ≥90% (HPLC)
肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)試劑盒 白屈菜4-雄烯-11β--3,17-二大黃 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%
肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)試劑盒 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ2,2-雙[4-(4-氨苯氧)苯]烷 98%大黃 98%
黏膜地址素黏附分子(MAdCAM-1)試劑盒白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ3-溴肉桂 98%達(dá)旦黃 CP
黏膜地址素黏附分子(MAdCAM-1)試劑盒白術(shù)內(nèi)酯III1,4-二(三硅烷)苯 96%烯縮水甘油酯 98%
β干擾素(IFN-β/IFNB)試劑盒白頭翁素二烯1,4-丁二酯, 含100ppm MEHQ 穩(wěn)定劑, 95%亞硫氫 AR
β干擾素(IFN-β/IFNB)試劑盒白頭翁皂苷A二烯1,3-丁二酯, 含500 ppm 對(duì)苯二酚(HQ)穩(wěn)定劑, 98%乙 99%
可溶性CD38(sCD38)試劑盒白頭翁皂苷B苯磺 98%乙 standard for GC, ≥99.5% (GC)
可溶性CD38(sCD38)試劑盒白頭翁皂苷B4正丁硫 standard for GC, ≥99% (GC)冰乙 AR,99.5%
可溶性CD21(CR2/sCD21)試劑盒 白頭翁皂苷DN-丁二乙 99%反式 GR,99.0%(劇品)
可溶性CD21(CR2/sCD21)試劑盒 白鮮雙酚A三雙烯酯 試劑級(jí)正丁 >99.5%(GC)
可溶性瘦素受體(sLR)試劑盒白楊素1-芐哌 97%正丁 ACS, ≥99.4%
可溶性瘦素受體(sLR)試劑盒白楊素-7-葡萄糖苷3-溴 分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析乙丁酯 for HPLC, ≥99.7% (GC)
TPS總蛋白SELISA試劑盒細(xì)胞存活率檢測(cè)試劑盒是通過檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性來檢測(cè)細(xì)胞的存活率。通常情況下細(xì)胞膜喪失即可認(rèn)為細(xì)胞研究死亡,本試劑盒中染料不能使正常健康保持完整細(xì)胞膜的細(xì)胞染色,而可以使細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞染色,通過顯微鏡下直接計(jì)數(shù)拍照后計(jì)數(shù),就可以對(duì)細(xì)胞存活率進(jìn)行精確的定量。
儲(chǔ)存條件:2-8℃避光保存。
有效期:一年。