所有產品僅供科研使用,不能用于食用和醫(yī)療等
產品名稱:鐵離子比色法檢測試劑盒
產品貨號:XFP10451
產品規(guī)格:100T
儲存條件:4℃保存
細胞鐵離子檢測試劑盒可用于培養(yǎng)細胞中鐵離子定量檢測。本試劑盒采用亞鐵嗪比色法可以定量細胞鐵離子,線性范圍5~300uM。產品包括標準品和空白對照,本試劑盒可進行100個樣品的檢測。鐵是人體必需的元素之一,對人體的新陳代謝和身體健康具有重要作用,血液中鐵的含量不足,就會造成缺鐵性貧血。鐵存在于人體所有的細胞內,各組織、器官包括各內分泌腺都含有鐵。肝臟、脾臟和肺組織內含量較為豐富。成人體內含鐵3~5克,大部分都以蛋白質復合物形式存在,極少部分以離子的形態(tài)存在。
檢測原理:
鐵與蛋白結合成復合物,在酸性介質中鐵從復合物中解離出來,再被還原劑還原成二價鐵, 并與亞鐵嗪生成紫紅色化合物,在 540-580nm 處可比色測定。
產品組成:
A. 細胞裂解液: 20 ml
B. 緩沖液: 5ml
C. 檢測劑: 3ml
D. 標準品: 1ml
E. 稀釋用液: 20ml
實驗步驟:
1. 樣品準備(以24孔板為例):
將含鐵元素DMEM培養(yǎng)過的細胞用冷的PBS 2ml洗兩遍,將PBS吸棄(若不馬上檢測可將其凍存于-20℃)。200ul/孔裂解液裂解細胞,置于搖床裂解2h。
2. 標準品的稀釋:用試劑盒提供的稀釋用液將3mM 的標準品母液稀釋為:300 uM、150uM、75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀釋并設置0濃度對照反應管。
3. 將緩沖液與4.5%高錳-酸鉀溶液按1:1混勻,稱為混液A。 注意:用戶自備4.5%高錳-酸鉀溶液 5ml。
4. 參考下表使用1.5ml離心管,設置空白對照管、標準品管和樣品管。如果樣品中的鐵元素含量過高,用裂解液適當稀釋后再進行測定。
空白對照 稀釋后的標準品 裂解的樣品
稀釋用液 100μl -
混液A 100μl 100μl 100μl
樣品 - - 100μl
標準品工作液 - 100μl -
5. 混勻,60℃ 孵育1h。
6. 冷卻至室溫,將管蓋與管壁上的液滴離心入管底。
7. 加入30ul 鐵離子檢測劑,混勻,室溫孵育,30min。
8. 取200ul 于96孔板,在550nm測定吸光度。如果不能測定550nm,也可以在540nm~580nm范圍內檢測。
9. 繪制標準曲線并計算鐵離子濃度。
本產品僅供科研實驗用,不做其它用途!
鐵離子比色法檢測試劑盒