本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1.操作簡(jiǎn)便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無(wú)需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。
2. 無(wú)放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。
3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來(lái)溶解甲臜產(chǎn)物。
4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。
商品屬性：
產(chǎn)品英文名稱(chēng)：Human 4-1BBL Protein, His tag (Animal-Free)
產(chǎn)品中文名稱(chēng)：重組人4-1BB配體,His標(biāo)簽無(wú)動(dòng)物源4-1BBL
規(guī)格：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg
貨號(hào)：EY-01X8896
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)
特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):
表達(dá)宿主:大腸桿菌
種屬:人
序列:氨基酸序列來(lái)源于：人源4-1BBL Protein (Arg71-Glu254) (P41273)
活性:Measure by its ability to induce IL-8 secretion in human PBMCs. The ED?? for this effect is 1-5 ng/mL.
蛋白長(zhǎng)度：重組人4-1BBL蛋白由184個(gè)氨基酸組成，預(yù)測(cè)分子量為20.4 KD。
純度:> 95 % ，使用SDS-PAGE檢測(cè)
通過(guò)LAL法測(cè)定，每微克蛋白里
背景
4-1BB ligand (4-1BBL) is a type II transmembrane protein that is part of the tumor necrosis factor (TNF) ligand family. As an inducible co-stimulatory molecule, it presents on several antigen presenting cell (APC) types, including B cells, macrophages and DCs. The interactions between 4-1BB and 4-1BBL trigger pleiotropic effects on the immune response including antigen presenting process, proliferation of CD4 and CD8 positive T-cells, as well as cytokine secretion from T-cells through NFκB, c-Jun, and p38 downstream signal pathways activation.Therefore, 4-1BB and 4-1BBL are recently used for the immunotherapy of cancer.
操作步驟：
(一)獲得目的基因
1、通過(guò)PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。
2、通過(guò)RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。
(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體
1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性?xún)?nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。
2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。
(三) 獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種
1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。
2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。
3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。
(四)誘導(dǎo)表達(dá)
1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過(guò)夜培養(yǎng)。
2、按1∶50比例稀釋過(guò)夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。
3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。
4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。
5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。
公司正在出售的產(chǎn)品：
CTRC Protein Human 重組人 CTRC / chymotrypsin C 蛋白
TNFRSF17重組小鼠 TNFRSF17 / BCMA 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
SIGIRR Protein Mouse 重組小鼠 SIGIRR / TIR8 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)
PGA4重組人 PGA4 / Pepsinogen A 蛋白 Protein
小鼠末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat alkaline phosphatase (ALP) ELISA Kit 大鼠堿性0酸酶(ALP)檢測(cè)試劑盒
HumanFreeProteinS,FP-SELISAKit 人游離蛋白S(FP-S)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanacetylcholinereceptoraibody,AChRab檢測(cè)試劑盒人乙酰受體抗體(AChRab)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T
正常人體腸組織S9組分(5毫克/毫升)500微升
Mouseai-cenolandcenosomeaibody,ACAELISAKit小鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠抗抗體(AOAb)檢測(cè)試劑盒 試劑盒 組裝/原裝
小鼠抗利尿激素/血管加壓素/精酸加壓素(ADH/VP/AVP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠抗鹽抵抗的酸性0酸酶(AP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠抗酸性0酸酶5b(ACP-5b)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠周期素依賴(lài)性激酶2(CDK2)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： CDK2 ELISA Kit
Mouse proliferating cell nuclear aigen aibody (PCNA) ELISA Kit 小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)檢測(cè)試劑盒
MouseBonemorphogeneticprotein4,BMP-4ELISAKit 小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumanInvolucrin,iNVELISAKit人套膜蛋白
微型RNA(miRNA)表達(dá)載體細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒10次
ELISAKitMIP-1β/CCL4大鼠巨噬細(xì)胞癥蛋白1β
重組人4-1BB配體,His標(biāo)簽無(wú)動(dòng)物源4-1BBLTNFRSF17重組小鼠 TNFRSF17 / BCMA 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
chloramphenicol/BSA 偶聯(lián)牛血清白蛋白 2mgchloramphenicol/BSA 偶聯(lián)牛血清白蛋白
PGA4重組人 PGA4 / Pepsinogen A 蛋白 Protein
CTRC Protein Human 重組人 CTRC / chymotrypsin C 蛋白
SIGIRR Protein Mouse 重組小鼠 SIGIRR / TIR8 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)
不適用于人類(lèi)或臨床診斷
