重組酶聚合酶擴(kuò)增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被稱(chēng)為是可以替代PCR的核酸檢測(cè)技術(shù)（由英國(guó)公司TwistDx Inc開(kāi)發(fā)）。以此為基礎(chǔ)的TwistAmp® 核酸擴(kuò)增產(chǎn)品，能夠在15分鐘內(nèi)進(jìn)行常溫下的單分子核酸檢測(cè)。該技術(shù)對(duì)硬件設(shè)備的要求很低，特別適合用于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物安全、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。
RPA檢測(cè)瘧原蟲(chóng)
核酸擴(kuò)增是目前zui靈敏的瘧原蟲(chóng)（P. falciparum）特異性檢測(cè)法。然而，PCR需要熱循環(huán)設(shè)備和專(zhuān)業(yè)性操作，資源匱乏的地區(qū)往往難以滿(mǎn)足這些條件。在這種情況下，與側(cè)流層析結(jié)合的RPA有著很大的應(yīng)用前景。
《Malaria Journal》雜志今年三月份發(fā)表的一項(xiàng)研究中，研究人員將RPA基礎(chǔ)反應(yīng)、TwistAmp nfo探針和側(cè)流層析結(jié)合起來(lái)，實(shí)現(xiàn)了瘧原蟲(chóng)18S rRNA基因的高靈敏度快速檢測(cè)。在38°C的條件下需要不到十分鐘的擴(kuò)增，就能檢出含有四個(gè)瘧原蟲(chóng)的樣本。加上側(cè)流層析的檢測(cè)時(shí)間，整個(gè)流程總共只需要15分鐘，而且肉眼可以直接看到檢測(cè)結(jié)果。
研究人員用不同瘧原蟲(chóng)測(cè)試了這種方法的靈敏度和特異性。研究顯示，所有瘧原蟲(chóng)都被成功檢出，所有非瘧原蟲(chóng)都得出了陰性結(jié)果。文章指出，這一方案將大大改善資源匱乏地區(qū)的瘧原蟲(chóng)分子診斷。（參考文獻(xiàn)：Rapid detection of Plasmodium falciparum with isothermal recombinase polymerase amplification and lateral flow analysis）
RPA檢測(cè)冠狀病毒
2012年在中東鑒定的中東呼吸綜合癥冠狀病毒( Middle East respiratory syndrome coronavirus，MERS-CoV)是一種新型的冠狀病毒。這種病毒很快傳入了歐洲，給公共安全機(jī)構(gòu)敲響了警鐘。
目前，MERS-CoV檢測(cè)主要依賴(lài)于實(shí)時(shí)RT-PCR，需要收集患者樣本然后到專(zhuān)門(mén)的實(shí)驗(yàn)室去檢驗(yàn)。因此，亟需能夠進(jìn)行實(shí)地檢測(cè)的快速裝置。
《PLOS Currents：Outbreaks》去年十二月發(fā)表的一項(xiàng)研究，開(kāi)發(fā)了一個(gè)能在3-7分鐘內(nèi)鑒定MERS-CoV的便攜式RT-RPA裝置。在42°C條件下，等溫MERS-CoV RT-RPA與實(shí)時(shí)RT-PCR一樣敏感，可檢出10個(gè)RNA分子。文章指出，這個(gè)便攜裝置是監(jiān)控MERS-CoV傳播，尋找其動(dòng)物宿主的理想方法。（參考文獻(xiàn)：Reverse Transcription Recombinase Polymerase Amplification Assay for the Detection of Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus）
除此之外，世界各地的研究者們近期還用RPA技術(shù)檢測(cè)了許多其他的病毒。比如南美對(duì)蝦濃核癥病毒、對(duì)蝦白斑綜合癥病毒、李痘病毒、櫻桃小果病毒2、黃熱病毒、牛冠狀病毒、施馬倫貝格病毒、牛病毒性腹瀉病毒、口蹄疫病毒等等。RPA甚至還被用來(lái)直接檢驗(yàn)?zāi)蛞褐械纳逞垡略w
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