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新技術(shù)介紹之轉(zhuǎn)染技術(shù)
點(diǎn)擊次數(shù)：984 發(fā)布時(shí)間：2014-9-25
導(dǎo)讀：在技術(shù)革新中，研究成功不是基于試驗(yàn)次數(shù)和資料收集得多少，往往是研究方法和研究技術(shù)的革新帶來(lái)的，細(xì)胞學(xué)家一般研究是把外源分子送入細(xì)胞內(nèi)，現(xiàn)如今有一種叫做轉(zhuǎn)染技術(shù)的新技術(shù)出現(xiàn)，本文就是對(duì)轉(zhuǎn)染技術(shù)進(jìn)行介紹。
過(guò)去的研究認(rèn)為在不考慮具體條件，LPEI/DNA 轉(zhuǎn)染復(fù)合物的細(xì)胞毒性較低，有利于細(xì)胞定位，因此與BPEI相比應(yīng)該轉(zhuǎn)染效率高一些。但zui近研究表明BPEI的分枝度高有利于形成小的轉(zhuǎn)染復(fù)合物，從而提高轉(zhuǎn)染效率，但同時(shí)細(xì)胞毒性也增大。超高分枝的、較柔性的PEI衍生物含有額外的仲胺基和叔胺基，在染實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)這種PEI的毒性低，但轉(zhuǎn)染效率卻較高。
GNOME轉(zhuǎn)染方案主要是通過(guò)短脈沖激光，在細(xì)胞膜上刺出微小的孔洞，使細(xì)胞外的分子能夠擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。研究者們嘗試這一策略給細(xì)胞遞送分子已經(jīng)有十多年了，但傳統(tǒng)方案的速度非常慢通量也很低。
首先將細(xì)胞與直徑約200+nm的金納米顆粒共同孵育，讓它們慢慢沉積到細(xì)胞上。三個(gè)小時(shí)之后，研究者們用短脈沖的綠色激光束照射樣本。這一過(guò)程在研究者自制的自動(dòng)化設(shè)備中進(jìn)行，該設(shè)備帶有能夠移動(dòng)培養(yǎng)皿的自動(dòng)載物臺(tái)和軟件，以便快速照射樣本。
吸收了這些光之后，金顆粒中的電子會(huì)快速震蕩并發(fā)熱。研究者們還不*清楚之后發(fā)生了什么事件，不過(guò)結(jié)果是細(xì)胞膜上出現(xiàn)了孔洞。Heinemann的研究團(tuán)隊(duì)使用這一技術(shù)將siRNA引入了犬類的癌細(xì)胞系，對(duì)一個(gè)基因進(jìn)行了有效的knocked+down。據(jù)估計(jì)，差不多有90%25的細(xì)胞被成功轉(zhuǎn)染，處理之后的細(xì)胞超過(guò)80%25仍有活性。
優(yōu)勢(shì)：GNOME轉(zhuǎn)染非常溫和，有很高的細(xì)胞活性，敏感細(xì)胞一般也能達(dá)到90%。
相信不久的將來(lái)這種技術(shù)會(huì)更加活躍，相繼出現(xiàn)轉(zhuǎn)染技術(shù)的各種產(chǎn)品和各種新型研究方法。