莽草酸脫氫酶(SD)測試盒_其它系列
測定方法:分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
注 意 :正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
莽草酸途徑是存在于植物、真菌和微生物中的一條重要的代謝途徑,莽草酸脫氫酶是莽草酸合成途徑中的關(guān)鍵酶。
莽草酸脫氫酶(SD)測試盒_其它系列
測定原理:
莽草酸脫氫酶催化莽草酸和NADP產(chǎn)生NADPH,檢測340nm下的吸光值增加速率來表示SD活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體60mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×2瓶,4℃保存;
粗酶液提?。?/p>
細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟:
1、分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
(1)在試劑二中加入25mL試劑一充分溶解混勻,置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴5min,現(xiàn)配現(xiàn)用。
(2)取0.05mL樣本和0.95mL試劑二于1mL比色皿中,混勻,在340 nm波長下立即記錄20秒時的初始吸光度A1和5分20秒時的吸光度A2,計算ΔA=A2-A1。