淀粉系列_可溶性淀粉合成酶(SSS)測(cè)試盒
測(cè)定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意:正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
SSS(EC 2.4.1.21)通常以游離態(tài)存在于質(zhì)體基質(zhì)中,催化淀粉鏈延長(zhǎng),主要負(fù)責(zé)支鏈淀粉的合成。
淀粉系列_可溶性淀粉合成酶(SSS)測(cè)試盒
測(cè)定原理:
SSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng),將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上,同時(shí)生成ADP,在反應(yīng)體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH,NADPH生成量與前一步反應(yīng)中ADP生成量呈正比,340nm下測(cè)定NADPH增加量即可計(jì)算SSS活性。
需自備的的儀器和用品
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:40mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入14mL試劑一充分混勻備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入8mL試劑一充分混勻備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;
試劑四:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入10mL試劑一充分混勻備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;
試劑五:液體×1支,-20℃保存;臨用前加入500μL蒸餾水,充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;
試劑六:粉劑×1支,-20℃保存;臨用前加入500μL蒸餾水,充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;
粗酶液制備:
按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。