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所 在 地上海市
更新時(shí)間:2021-03-29 14:32:00瀏覽次數(shù):381次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 環(huán)保在線A9細(xì)胞,小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞規(guī)格
RN-c細(xì)胞,大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞供應(yīng)商
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
下列是產(chǎn)品的訂購信息:
產(chǎn)品名稱 | ST2/o細(xì)胞,小鼠雜交瘤細(xì)胞供應(yīng)商 |
英文名稱 | ST2/o cells, a murine hybridoma cell |
貨號(hào) | EY-X64189 |
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
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實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
ARPE-19(人視網(wǎng)膜上細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
NCI-H596(人肺腺鱗細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
泡盛曲霉 Aspergillus awamoriCitrate Buffer(100x)/檸檬酸緩沖液(IHC抗原修復(fù)液, 100x)
1% NaC1阿拉伯糖發(fā)酵管BR20支國產(chǎn)/進(jìn)口
大鼠腎動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基 規(guī)格: 250g 用途: 滅菌后冷至45℃左右時(shí)加入5%脫纖維羊血,用于空腸彎菌的培養(yǎng)。(CP、GB、EP、USP)
大鼠腦微血管內(nèi)細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
唾液桿菌水楊素亞種 Lactobacillus salivarius subsp. salicinius人淋巴血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基
HBZY-1(大鼠腎小球系膜細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
MOLT-4全細(xì)胞裂解液100μg
U-87 MG(人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
ST2/o細(xì)胞,小鼠雜交瘤細(xì)胞供應(yīng)商PE標(biāo)記鏈霉親和素Streptavidin/PE 0.1ml
堿性磷酸酶標(biāo)記鏈霉親和素Streptavidin/AP 0.1ml
辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素Streptavidin/HRP 0.1ml
金標(biāo)記鏈霉親和素(10nm/15nm)Streptavidin/Gold 0.5ml
辣根過氧化物酶標(biāo)記親合素Avidin/HRP 0.1ml
辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗人IgARabbit Anti-human IgA/HRP 0.1ml
辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗HRPRabbit Anti-HRP/HRP 0.1ml
辣根過氧化物酶標(biāo)記的蛋白AProtein A/HRP 0.1ml
辣根過氧化物酶標(biāo)記牛血清白蛋白BSA/HRP 0.1ml
辣根過氧化物酶標(biāo)記人胰島素蛋白Insulin/HRP 500ug
堿性磷酸酶標(biāo)記Biotin/AP 0.1ml
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