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培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
下列是產品的訂購信息:
產品名稱 | IEC-6細胞,大鼠小腸隱窩上皮細胞供應商 |
英文名稱 | IEC-6 cells, rat small intestinal crypt epithelial cells |
貨號 | EY-X64257 |
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
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實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
克雷伯氏顯色培養(yǎng)基250克國產/進口
SDS-PAGE濃膠緩沖液(4x)植物桿菌 Lactobacillus plantarum
巴固氮螺菌 Azospirillum brasilense
CRT(人神經膠質瘤細胞)5×106cells/瓶×2
植物桿菌 Lactobacillus plantarum涇陽鏈霉菌 Streptomyces jingyangensis
細胞外信號調節(jié)激酶2(ERK2)重組蛋白Recombinant Extracellular Signal Regulated Kinase 2 (ERK2)
草菇 Volvariella bombycina
SuperPolymer Rabbit&Mouse HRP Kit(DAB)/Super Polymer-二步法IHC試劑盒(帶DAB顯色液)3ml、18ml國產
圓弧青霉 Penicillium cyclopiumCW-2(人結腸細胞)
HUVEC(HUV-EC-C) (人臍靜脈血管內細胞)5×106cells/瓶×2
大鼠腦靜脈血管平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL
IEC-6細胞,大鼠小腸隱窩上皮細胞供應商人胰島素樣生長因子結合蛋白4IGFBP-4(Human insulin-like growth factors binding protein 4) ELISA Kit 96T
人胰島素樣生長因子結合蛋白3IGFBP-3(Human insulin-like growth factors binding protein 3) ELISA Kit 96T
小鼠胰島素樣生長因子結合蛋白1IGFBP-1(Mouse Insulin-like growth factor binding protein 1) ELISA Kit 96T
大鼠β-防御素Beta-DF ELISA Kit 96T
小鼠胰島素樣生長因子結合蛋白2IGFBP-2(Mouse Insulin-like growth factor binding protein 2) ELISA Kit 96T
人胰島素樣生長因子結合蛋白2IGFBP2(Human insulin-like growth factors binding protein 2) ELISA Kit 96T
大鼠多巴胺D1受體D1R ELISA Kit 96T
人胰島素樣生長因子結合蛋白1IGFBP-1(Human insulin-like growth factors binding protein 1) ELISA Kit 96T
大鼠腎上腺素能a1A受體ADRA1A ELISA Kit 96T
小鼠白介素16IL-16(Mouse Interleukin 16) ELISA Kit 96T
小鼠白介素3IL-3(Mouse Interleukin 3) ELISA Kit 96T
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