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上海一研生物科技有限公司
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敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-21保存

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更新時(shí)間:2019-02-25 14:17:14瀏覽次數(shù):855次

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細(xì)胞名稱  敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-21保存
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)

特征特性 該細(xì)胞系是于1961年由Macpherson IA、Stoker MGP建系,源自5只未辨性別的1天齡倉(cāng)鼠腎;可作為轉(zhuǎn)化宿主;OIE組織將該細(xì)胞用于狂犬病的診斷。

培養(yǎng)條件 DMEM-H:

Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 15%NBS  

傳代方法 1:

3傳代;3-4天一次  

傳代情況 PN4

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS


敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-21保存在運(yùn)輸?shù)倪^程中,細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來,因此客戶在收到貨以后的*時(shí)間是要先觀察產(chǎn)品的狀況,顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況,出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí),請(qǐng)不要立即打開培養(yǎng)瓶,應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱過夜,并于次日在顯微鏡下觀察,此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁。如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞仍不能貼壁,請(qǐng)?jiān)囍门_(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請(qǐng)按懸浮細(xì)胞的方法處理;如若證實(shí)細(xì)胞無活力,請(qǐng)?jiān)谑盏截浐?8小時(shí)內(nèi)將細(xì)胞狀態(tài)反饋給我公司,我們將盡快幫助解決。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-21保存培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,貨號(hào)16000-044),15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
注意事項(xiàng):
1.收到敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-21保存后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)絡(luò)。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?,故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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質(zhì)量規(guī)格:供檢查用alpha-Lactose,monohydrate乳糖;α-乳糖,一水

質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定Lactobionicacid乳糖酸(>98%,BC)

質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定Okadaicacid,freeacid軟海綿酸(>95.0%,BC)

質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定Okadaicacid,sodiumsalt軟海綿酸鈉(>95.0%,BC)

質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測(cè)定PrionPeptide(106-126),Human朊病毒肽(106-126),人

質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定Fipronil銳勁特(標(biāo)準(zhǔn)品)

質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測(cè)定Regorafenib(BAY73-4506)瑞格非尼

質(zhì)量規(guī)格:UV法含量測(cè)定Repaglinide

CHDH/Cholinedehydrogenase脫酶抗體規(guī)格:0.2ml

RabbitAnti-humanIgGF(ab')2/PE-Cy3PE-Cy3標(biāo)記的兔抗人IgGF(ab')2規(guī)格:0.1ml

CD226/DNAM-1CD226抗體規(guī)格:0.1ml

RNF149環(huán)指蛋白149抗體規(guī)格:0.2ml

OGG1/8hydroxyguanineDNAglycosylase8-羥基DNA糖基化酶規(guī)格:0.1ml

HDAC2/HD2組蛋白去乙?;?抗體規(guī)格:0.1ml

NALP12NALP12抗體規(guī)格:0.2ml

BRLF1EBV立即早期基因BRLF1抗體0.2ml

MEF2D肌細(xì)胞特異性增強(qiáng)因子2D抗體規(guī)格:0.2ml

DRP3/Dystrobrevinalpha肌營(yíng)養(yǎng)蛋白α抗體規(guī)格:0.2ml
敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-21保存BrothmediumD(Lactosemonohydratebroth)250g肉湯培養(yǎng)基D

BrothmediumA(Caseinsoyabeandigestbroth)250g肉湯培養(yǎng)基A

BrothMedium250g普通肉湯培養(yǎng)基

Brothmedium250g肉湯培養(yǎng)基I

BromocresolPurplePeptoneMedium250g溴甲酚紫蛋白胨培養(yǎng)液

BromcresolPurpleDextrosePeptone250g溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基

BromcresolPurpleDextroseBroth250g溴甲酚紫葡萄糖肉湯

 

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