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所 在 地上海市
更新時(shí)間:2021-03-29 14:25:47瀏覽次數(shù):537次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 環(huán)保在線A9細(xì)胞,小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞規(guī)格
RN-c細(xì)胞,大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞供應(yīng)商
細(xì)胞培養(yǎng)方法:
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
下列是產(chǎn)品的訂購信息:
產(chǎn)品名稱 | H22-H8D8細(xì)胞,鼠肝癌細(xì)胞規(guī)格 |
英文名稱 | H22-H8D8 cells, rat hepatoma cells |
貨號(hào) | EY-X64220 |
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
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培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
BHK-21(倉鼠腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
玉蜀黍赤霉 Gibberella zeae香拴菌
抗生素Ⅳ號(hào)培養(yǎng)基/抗生素4號(hào)培養(yǎng)基/Antibiotic Agar NO.4等藥品的效價(jià)測(cè)定250克國產(chǎn)/進(jìn)口
SW1116(人結(jié)腸腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
淡紫擬青霉 Paecilomyces lilacinus檸檬串珠菌 Leuconostoc citreum
青霉菌 Penicillium sp.釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
卵黃培養(yǎng)基基礎(chǔ)/卵黃高鹽瓊脂基礎(chǔ)/Egg-Yolk Mannitol Salt Agar Base金黃色葡萄球菌的分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進(jìn)口
HuT 78(人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞)普通變形菌 Proteus vulgaris
人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞MuM-2B
結(jié)腸C26瘤
CTLL-2(小鼠T細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
H22-H8D8細(xì)胞,鼠肝癌細(xì)胞規(guī)格大鼠可溶性白介素6受體sIL-6R ELISA Kit 96T
兔可溶性凋亡相關(guān)因子sFAS/Apo-1 (Rabbit soluble Factor-related Apoptosis) ELISA Kit 96T
人腫瘤壞死因子相關(guān)激活誘導(dǎo)因子TRANCE(Human TNF related activation induced cytokine) ELISA Kit 96T
兔6酮前列腺素F1a6-keto-PGF1a (Rabbit 6-keto-prostaglandin F1a) ELISA Kit 96T
小鼠肌鈣蛋白TMouse Troponin T,Tn-T ELISA Kit 96T
麥胚凝集素/凝集蛋白Wheat germ agglutinin,WGA ELISA Kit 96T
大鼠吡啶酚PYD ELISA Kit 96T
人生長激素釋放因子GH-RF(Human growth hormone relasing factor) ELISA Kit 96T
大鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解酶2BACE2 ELISA Kit 96T
小鼠c-fosMouse c-fos ELISA Kit 96T
荊豆凝集素Ulex Europaeus agglutinin,UEA ELISA Kit 96T
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