產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類(lèi)或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱(chēng)：AbFluor•  594-Phalloidin

產(chǎn)品中文名稱(chēng)：AbFluor•  594-鬼筆環(huán)肽

規(guī)格：500 T

貨號(hào)：EY-01X8575
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):

•  優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)方案，特別適用于甲醛固定與透化處理的組織切片、細(xì)胞培養(yǎng)物或無(wú)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的F-actins標(biāo)記，鑒定以及定量需求。

•  的AbFluor•  594-鬼筆環(huán)肽 (紅色熒光) (Ex/Em = 590/617 nm），特異性地結(jié)合F-actins，且兼具比其它熒光素-鬼筆環(huán)肽偶聯(lián)物更強(qiáng)的光穩(wěn)定性。

產(chǎn)品形式凍干粉產(chǎn)品

使用中注意事項(xiàng)鬼筆環(huán)肽為有毒物質(zhì)，請(qǐng)小心處理。

保存建議:-20℃，避光保存12個(gè)月。

運(yùn)輸條件:藍(lán)冰運(yùn)輸

背景

鬼筆環(huán)肽（phalloidin），是從一種劇毒磨菇(Amanita phalloides)中分離出來(lái)的一種多肽物質(zhì)，屬于毒傘肽類(lèi)毒素，是一種強(qiáng)烈毒素。它是一種特異性結(jié)合F-肌動(dòng)蛋白的雙環(huán)肽，因此，使用熒光染料偶聯(lián)的鬼筆環(huán)肽可以非常方便地研究F-actins的分布。在鬼筆環(huán)肽內(nèi)部，半和之間存在不尋常的硫醚橋，可形成內(nèi)環(huán)結(jié)構(gòu)。當(dāng)pH升高時(shí)，硫醚被裂解，鬼筆環(huán)肽喪失對(duì)肌動(dòng)蛋白的親和力。

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡(jiǎn)便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無(wú)需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無(wú)放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來(lái)溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過(guò)PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過(guò)RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過(guò)夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過(guò)夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。

公司正在出售的產(chǎn)品：

alpha Adaptin/AP1 銜接蛋白α抗原 0.5mgalpha Adaptin/AP1 銜接蛋白α抗原

CPLX2 Protein Human 重組人 Complexin-2 / CPLX2 蛋白

IL6ST重組小鼠 IL6ST / gp130 / CD130 蛋白 Protein

BST1 Protein Rat 重組大鼠 CD157 / BST1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

C1D重組人 C1D 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein

小鼠熱休克因子1(HSF1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human brain naiuretic peptide / brain naiuretic peptide (BNP) ELISA Kit 人腦素/腦尿肽(BNP)檢測(cè)試劑盒

HumanEsogen-inducedproteinpS2ELISAKit 人雌激素誘導(dǎo)蛋白PS2檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

guineapigIerferonγ,IFN-γ檢測(cè)試劑盒豚鼠γ干擾素(IFN-γ)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒20次

MouseCarboxyterminalpropeptideoftypeⅠprocollagen,PⅠCPELISAKit小鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲酸蛋白酶抑制劑(vaspin)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠內(nèi)皮抑素(ES)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠酰胺腺嘌呤二核苷酸0酸(NAADP)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： NAADP ELISA Kit

Mouse thrombin receptor () ELISA Kit 小鼠受體()檢測(cè)試劑盒

MouseErythropoietieceptor,EPORELISAKit 小鼠紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanCompleme4,C4ELISAKit人補(bǔ)體蛋白4

細(xì)胞CASEINKINASE1激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitLebtospira大鼠鉤端IgG

AbFluor•  594-鬼筆環(huán)肽IgG2a重組小鼠 IgG2a-Fc 蛋白 Protein

胞外超氧化物歧化酶(SOD3)重組蛋白 Recombinant Superoxide Dismutase 3, Extracellular (SOD3)

AKR1C2重組人 AKR1C2 蛋白 Protein

CPLX2 Protein Human 重組人 Complexin-2 / CPLX2 蛋白

CD59 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD59 / CD59A / MAC-IP 蛋白