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恒遠技術(shù)部總結(jié):細胞培養(yǎng)常見問題

閱讀:250發(fā)布時間:2013-4-2

 1.如何選擇培養(yǎng)基?

培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞,很可能在DMEMM199中同樣很容易生長??傊?/span>MEM做粘附細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng),各種目的無血清培養(yǎng)的是AIM V培養(yǎng)基(SFM)。

2.為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在進行免疫學研究、培養(yǎng)ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。

3.L-*在細胞培養(yǎng)中重要嗎?它在溶液中不穩(wěn)定嗎?

L-*在細胞培養(yǎng)時是重要的。脫掉氨基后,L-*可作為培養(yǎng)細胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-*在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解,但是確切的降解率一直沒有zui終確定。L-*的降解導致氨的形成,而氨對于一些細胞具有毒性。

4.GlutaMAX-I是什么?培養(yǎng)細胞如何利用GlutaMAX-I?這個二肽有多穩(wěn)定?

GlutaMAX-I二肽是L-*的衍生物,將其不穩(wěn)定的α-氨基用L-*來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-*供利用。

GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定,即使在121磅滅菌20分鐘,GlutaMAX-I二肽溶液有zui小的降解,如果在相同條件下,L-*幾乎*降解。

5.為什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅?

酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用(特別是雌激素)。為避免固醇類反應,培養(yǎng)細胞,尤其是哺乳類細胞時,用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細胞檢測時,不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。

 

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