注意事項：

1. 本試劑盒的檢測試劑中含有螢光素酶，反復(fù)凍融會導(dǎo)致其逐漸失活。盡管經(jīng)測試本試劑反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，為取得良好的使用效果，*次解凍后可適當(dāng)分裝保存。反復(fù)凍融過程中，可能會導(dǎo)致檢測試劑中出現(xiàn)少量沉淀，此時宜平衡至室溫，并盡量溶解。如仍有殘留的不溶物，可以離心去除后使用，經(jīng)測試不會影響后續(xù)的檢測效果。

2. 檢測時需使用白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板，相鄰孔之間會產(chǎn)生相互干擾。

3. Annexin V-PE/7-AAD細(xì)胞凋亡流式檢測試劑盒使用說明中提供了檢測ATP標(biāo)準(zhǔn)品的方法，實際檢測細(xì)胞活力時通常并不需要檢測ATP標(biāo)準(zhǔn)品。

細(xì)胞凋亡早期改變發(fā)生在細(xì)胞膜表面，這些細(xì)胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲an酸(PS)從細(xì)胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外，使PS暴露在細(xì)胞膜外表面。PS是一種帶負(fù)電荷的磷脂，正常主要存在于細(xì)胞膜的內(nèi)面，在細(xì)胞發(fā)生凋亡時細(xì)胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS暴露在細(xì)胞膜外。Annexin V具有易于結(jié)合到磷脂類如PS的特性，對PS有高度的親和性。因此，該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測暴露在細(xì)胞膜表面的PS。PS轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外不是凋亡所的，也可發(fā)生在細(xì)胞壞死中。兩種細(xì)胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細(xì)胞膜是完好的，而細(xì)胞壞死在其早期階段細(xì)胞膜的完整性就被破壞。7-AAD是一種核酸染料，可進(jìn)入死細(xì)胞內(nèi)與DNA結(jié)合，能夠?qū)乃篮偷蛲鐾砥诘募?xì)胞進(jìn)行染色。7-ADD與PI有著相似的熒光特性，但其發(fā)射波譜較PI窄，對其他檢測通道的干擾更小，在多色熒光分析中是PI的替代品，因此通常將Annexin V-PE與ADD配合染色，以區(qū)別凋亡早期細(xì)胞與壞死細(xì)胞和凋亡的晚期細(xì)胞。

操作步驟：

1、細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：

a．對于貼壁細(xì)胞：小心收集細(xì)胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用消化細(xì)胞，至細(xì)胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時，加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細(xì)胞，并輕輕吹散細(xì)胞。再次收集到離心管內(nèi)。1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細(xì)胞。對于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞。

b．對于懸浮細(xì)胞：1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細(xì)胞。對于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細(xì)胞。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞。

2、用去離子水按1:3稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer+12ml去離子水)。

3、用250μl Binding Buffer重新懸浮細(xì)胞，調(diào)節(jié)其濃度為1×106/ml。

4、取 100μl 的細(xì)胞懸液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V-PE 和 10μl 7-AAD 溶液。

5、混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘。

6、在反應(yīng)管中加400μl PBS，流式細(xì)胞儀(FACS)分析。

Jurkat細(xì)胞用誘導(dǎo)凋亡后用Annexin V-PE/7AAD雙染流式分析圖譜

儲存條件：2～8℃，避光保存

本試劑盒是一種采用Annexin-PE與7-AAD雙染法進(jìn)行細(xì)胞早期凋亡分析的檢測試劑盒。

公司正在出售的產(chǎn)品：

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

細(xì)胞生物學(xué)研究的常用技術(shù)有哪些：

1.顯微技術(shù)：包括顯微觀察,顯微操作.

2細(xì)胞組分分析技術(shù)：離心分離技術(shù),生物大分子定位技術(shù),定量細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù).
3.細(xì)胞工程：細(xì)胞培養(yǎng)。