79.0潔凈室質(zhì)量控制及其檢測(cè)方面的討論

時(shí)間：2013-3-14閱讀：328

79.0潔凈室質(zhì)量控制及其檢測(cè)方面的討論

關(guān)鍵詞：懸浮粒子塵埃粒子 表面微生物 空氣采樣器細(xì)菌采樣器

　潔凈室對(duì)于制藥產(chǎn)業(yè)的重要意義已為人們肯定。生物制品是制藥產(chǎn)業(yè)的一部分，對(duì)生產(chǎn)廠房有很高的潔凈要求［1，2］。Gilland等曾在市售的嗜酸乳桿菌產(chǎn)品中，分離到人為污染的短乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌和植物乳桿菌等［3］。生物制品生產(chǎn)中，尤其是活菌、活疫苗的生產(chǎn)中，經(jīng)常受到不同程度的污染，因此，不僅需要重視潔凈室的建立，更要重視質(zhì)量控制方法及標(biāo)準(zhǔn)。

　　朝鮮戰(zhàn)爭(zhēng)中，美國(guó)發(fā)現(xiàn)大量電子儀器失靈，zui后找到了主要原因，是灰塵在作怪，促成了潔凈技術(shù)的起步。1961年，誕生了世界上zui早的潔凈室標(biāo)準(zhǔn)，既美國(guó)*技術(shù)條令203，1963 年，頒布了上zui的潔凈室標(biāo)準(zhǔn)：美國(guó)聯(lián)邦FS209。1966年，頒布了修訂后的209A，時(shí)至1992年，建立了迄今被廣泛采用的209E。上為了加強(qiáng)藥品、生物制品質(zhì)量治理規(guī)范（GMP），把潔凈室定為*的生產(chǎn)硬件之一。GMP對(duì)廠房、設(shè)備等，明確規(guī)定了相應(yīng)的潔凈要求，并制訂了有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

1　潔凈室的污染源

　　潔凈室污染源按性質(zhì)可分物理、化學(xué)、生物等。直徑在0.001-1000μm的固態(tài)、液態(tài)或二者的混合物質(zhì)，包括生物粒子和非生物粒子，我們稱(chēng)為懸浮粒子（airborne particles）。微生物一般以無(wú)生命的粒子作載體而懸浮，以氣溶膠（Aerosol）形式存在于空氣中，1μm以下者永外懸浮，10μm以上者會(huì)逐漸沉下來(lái)而形成菌塵。潔凈室污染可分為外部污染和內(nèi)部污染。外部污染指大氣塵污染，可以通過(guò)光電法測(cè)得。內(nèi)部污染，是由人和有關(guān)的物品、設(shè)備等引起的。人是潔凈室zui大的污染源，占90%左右。人和環(huán)境造成了潔凈室的污染，所以在潔凈室中，人的數(shù)目和活動(dòng)應(yīng)有特別嚴(yán)格的限制。一般男性每人每分鐘向四周排放1000個(gè)以上的含菌粒子，女性為750個(gè)以上。穿衣服時(shí)，靜止態(tài)發(fā)菌量為10-300個(gè)/min·人，行走時(shí)的發(fā)菌量為900-2500個(gè)/min·人?？人砸淮伟l(fā)菌量為70-700個(gè)/min·人，噴嚏一次為400-60 0個(gè)/min·人［4，5］。

2　潔凈室質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

表1　世界主要國(guó)家潔凈室標(biāo)準(zhǔn)（潔凈度級(jí)別）

美國(guó)	日本	西德	美國(guó)	澳大利亞	法國(guó)	歐共體	中國(guó)
Fed Std 　　209	JACA 　　Std No24	VDI 　　2083	BSI 　　BS 5295	AS 　　AS 1386	AFNOR 　　X.44101	EEC 　　GMP	GB
-	1	-	-	-	-	-	-
-	2	0	-	-	-	-	-
1	3	1	C	0.035	-	-	-
10	4	2	D	0.35	-	-	-
100	5	3	E orF	3.5	4000	A/B	100
1000	6	4	GorH	35	40000	-	-
10000	7	5	J	350	400000	C	10000
100000	8	6	K	3500	4000000	D	100000
-	-	7	L	-	-	-	-
-	-	-	M	-	-	-	-

　　潔凈室是指空氣潔凈度達(dá)到規(guī)定級(jí)別要求的可供人類(lèi)工作的場(chǎng)所，其功能是控制微粒的污染。一般按用途可分為：1.產(chǎn)業(yè)潔凈室，以無(wú)生命的微粒為控制對(duì)象；2.生物潔凈室，主要控制微生物對(duì)工作對(duì)象的污染。

　　世界主要國(guó)家的潔凈室標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1［6，7］。美國(guó)事世界上zui早頒布潔凈室標(biāo)準(zhǔn)的國(guó)家，各國(guó)的潔凈室標(biāo)準(zhǔn)都是在美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，結(jié)合各國(guó)的實(shí)際情況而制訂的，我國(guó)的標(biāo)準(zhǔn)基本上參照美國(guó)聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)和歐共體的標(biāo)準(zhǔn)而制訂的。

　　3　潔凈室質(zhì)控的檢測(cè)方法及討論［8］

　　3.1　塵埃粒子　由于空氣中存在大量塵埃粒子，而微生物大多依附于這些塵埃粒子隨空氣活動(dòng)造成污染。制藥產(chǎn)業(yè)用多種方法獲得無(wú)菌狀態(tài)，過(guò)濾法以其捕集率高，又經(jīng)濟(jì)而被廣泛使用。其中，特別應(yīng)該提到的是采用了HEPA（High Eicienoy Particulate Air）過(guò)濾器，對(duì)0.3μm以上空氣粒子捕集率高達(dá)99.97%以上，除濾過(guò)病毒外，空氣中所有微生物顆?？杀粸V除。因此，正常潔凈室是無(wú)菌的，但是，由于人、物、環(huán)境等污染因素，潔凈室往往受到不同程度污染。因此，我們多采用激光塵埃粒子計(jì)數(shù)且進(jìn)行監(jiān)控。標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表2。

表2　國(guó)內(nèi)外有關(guān)懸浮粒子的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)（塵粒數(shù)/m3）

潔凈度　　級(jí)別	中國(guó)衛(wèi)生部　　GMP		美　國(guó) 　　FS-209.		世界衛(wèi)生組織及　　歐共體GMP
潔凈度　　級(jí)別	≥0.5μm	≥5μm	≥0.5μm	≥5 μm	≥0.5μm	≥5μm
100	≤3500	0	3530	-	3500	-
10000	≤350000	≤2000	353000	2470	350000	2000
100000	≤3500000	≤20000	3530000	24700	3500000	2000

3.2　空氣微生物　空氣中活微生物大多依附塵埃粒子而形成生物活性粒子。應(yīng)用細(xì)菌采樣器抽取一定量的空氣使其滯留在培養(yǎng)基上，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)計(jì)數(shù)菌落數(shù)。早在現(xiàn)代微生物問(wèn)世之前，人們就以為某些疾病是由被稱(chēng)為“瘴氣”的空氣污染而引起。20世紀(jì)30年代，英國(guó)研制porton液體采樣器，美國(guó)研制了AGI液體采樣器。1941年，Bourdion使用裂縫式采樣器，成為空氣微生物采樣測(cè)定的開(kāi)端。1956年，報(bào)道了*個(gè)篩孔撞擊式采樣器，1958年A.A.Andersn對(duì)其加以改進(jìn)并定型生產(chǎn)，稱(chēng)為安德森（Anderson）空氣微生物采樣器。它由頂罩、6節(jié)篩板、3個(gè)彈簧及抽氣孔和動(dòng)力裝置構(gòu)成。目前，這種采樣器已發(fā)展到8級(jí)，并有很多改進(jìn)型。由于它采集粒譜廣、效率高、生物失活率低等原因而廣泛使用至今?？諝馕⑸锊蓸悠饕话惴譃槠叽箢?lèi)：液體式、固體式、沉降式、離心式、光散射式和大容量式。本文將對(duì)離心式空氣微生物采樣器（R CS）作具體討論。空氣微生物測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表3。

表3　國(guó)內(nèi)外有關(guān)空氣微生物的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)（CFU/m3）

潔凈度級(jí)別	美國(guó)NASA	WHO和歐共體GMP	中國(guó)衛(wèi)生部GMP
100	3.5	5	≤5
10000	17.6	100	≤100
100000	88.4	500	≤500

3.3　表面微生物　為了檢測(cè)潔凈室中墻壁、地板、儀器表面、桌面、門(mén)把等帶菌情況，通常選用接觸壓印法（Cortact）和棉拭法（Swabbing）等方法。需要時(shí)，還可與過(guò)濾裝置相結(jié)合來(lái)完成棉拭采樣。1941年，Walter和Hvcker報(bào)道了COntact瓊脂平板方法，以后，Angelotti和Fotert等作了進(jìn)一步的工作。帶菌狀況都有要求，歐共體GMP（草案）規(guī)定，100級(jí)：均勻菌落數(shù)不可超過(guò)5 個(gè)；1000級(jí)：25個(gè)；100000級(jí)：50個(gè)。表面微生物的檢測(cè)，越來(lái)越受到人們的重視。

　　3.4　關(guān)于沉降平皿（Settle plate）　1881年Kock創(chuàng)立。依靠空氣中的粒子自然沉降于瓊脂平板上的這種采集方法，由于粒子沉降的速率很慢，如需采集到有效數(shù)目的粒子，就需暴露很長(zhǎng)時(shí)間。但因空氣中的致病菌數(shù)目是很少的，金黃色菌菌球菌在醫(yī)院病房空氣中均勻每140升才有一個(gè)活菌粒子，為了彌補(bǔ)這個(gè)缺陷，曾采用直徑為14公分的大平皿，以增加瓊脂的暴露面積。Harding和Williams還曾用一種多層平板的方法來(lái)進(jìn)一步暴露面積，每層放一個(gè)14公分直徑的平板，但結(jié)果不堪滿足。

　　奧姆梁斯基曾試圖把采樣后平板上長(zhǎng)出的菌落換算成一定體積空氣中的微生物含量，以便能利用沉降平板法的采樣結(jié)果來(lái)測(cè)定空氣中的活菌濃度。為此，他設(shè)定了在100cm2營(yíng)養(yǎng)瓊脂上暴露5分鐘后，培養(yǎng)長(zhǎng)出的菌落，即相當(dāng)于10升空氣中的活菌數(shù)。由于懸浮在空氣中的含菌粒子直徑不超過(guò)100μm，這些小粒子在空氣中的沉降受空氣阻力的影響，其沉降速率遵循上的Stokes公式。根據(jù)這個(gè)公式，粒子的沉降速率與其大小成正比，但是，奧姆梁斯基恰好忽略了這一點(diǎn)，因此，它是不能成立的。例如，直徑1μm的含菌粒子，在5分鐘內(nèi)沉降間隔為1.05cm，大部分的粒子就沉降不到瓊脂表面上。

　　由于潔凈室已濾除了大部分大顆粒，一般用此法是無(wú)意義的。但是，人為、環(huán)境和潔凈裝置故障等原因引起的較大顆粒污染以及沉降平板采樣潔的簡(jiǎn)便，可作為日常監(jiān)測(cè)潔凈室水平的一種參考方法。

3.5　關(guān)于RCS［9］　離心式空氣采樣器（The Reuter Centrifugal Sampler,RCS）被先容作為一種在醫(yī)院使用的檢測(cè)空氣微生物的儀器，由于它輕便，無(wú)噪音而廣泛使用，并擴(kuò)展到制藥產(chǎn)業(yè)等領(lǐng)域。RCS通過(guò)離心收集顆粒，為制藥產(chǎn)業(yè)所接受，由于它似乎符合FDA所描述的“Active”采樣儀器。。Gre-schel等以為它相當(dāng)有效，Macher等則持反對(duì)意見(jiàn)。多年來(lái)，很多研究者研究了帶菌顆粒的大小，結(jié)論是：5-15μm，中等粒是13μm，而4μm以下很少。這些結(jié)果是從醫(yī)院、手術(shù)室、辦公室、實(shí)驗(yàn)室和制藥無(wú)菌室所獲得。他們以為，假如顆粒大小是已知的，RCS可定量測(cè)定細(xì)菌濃度，但是，目前這些顆粒大小是未知的，故不能把它視為定量采樣器，只能回于沉降平皿一樣的類(lèi)型。Delmore等發(fā)現(xiàn)，100級(jí)無(wú)菌室中，RCS/slit比率是2.1，即RCS是s lit采樣器微生物捕促率的210%有效。我國(guó)丁璽華等也仿制了RCS，選用國(guó)產(chǎn)元件，試制了LW C-1型離心式空氣采樣器。

　　固然RCS有正反兩方面的爭(zhēng)議，但由于它有很多優(yōu)點(diǎn)，并明顯優(yōu)于沉降平皿，1986年，西方近一半的制藥公司采用了RCS，作為空氣微生物采樣器，我國(guó)正在逐漸推廣。

　　作者單位：姚祖華　上海生物制品研究所，上?！?/span>200052

　　李亦德　上海生物制品研究所，上?！?/span>200052

　　參考文獻(xiàn)

　?。?/span>1］國(guó)家醫(yī)藥治理局：藥品生產(chǎn)質(zhì)量治理規(guī)范（討論稿）.1998.11.

　?。?/span>2］孫淑濱.微生物學(xué)和免疫學(xué)進(jìn)展，1998，26（1）：89.

　?。?/span>3］Gilliland S E,et al.J Food prot.1977,40（11）:760～762.

　?。?/span>4］許鐘麟.潔凈室設(shè)計(jì).第1版.地震出版社，1994.

　?。?/span>5］郁慶福.現(xiàn)代衛(wèi)生微生物學(xué).第1版.人民衛(wèi)生出版社，1995.

　?。?/span>6］GB/T.1996,16292

　?。?/span>7］Mokker a Km et al.Cleanroom Standatds & practices:worldwide.Vpdate.Clean Room Evropa proceedings,1991.

　?。?/span>8］PDA.J Parenter Sci Technol 1990.（Sup）,44:3～15.

　?。?/span>9］Kaye S.J parenter Sci Technol 1988,42（5）:147～152.

-------摘自《中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志》

塵埃粒子計(jì)數(shù)器.生物安全柜.凈化工作臺(tái).風(fēng)量?jī)x.氣溶膠發(fā)生器.溫濕度壓差測(cè)試儀.浮游細(xì)菌采樣器.光度計(jì).通風(fēng)柜.傳遞窗.風(fēng)淋室.激光塵埃粒子計(jì)數(shù)器.空氣凈化器.過(guò)濾器.層流罩.環(huán)境檢測(cè)儀.離子風(fēng)蛇.潔凈工作臺(tái).凈化設(shè)備.CLJ-D塵埃粒子計(jì)數(shù)器.風(fēng)速儀.風(fēng)量罩.壓差計(jì).溫濕度表.照度計(jì).聲級(jí)計(jì).凈化檢測(cè)儀器.潔凈烘箱.生物潔凈工作臺(tái).潔凈傳遞窗.FFU送風(fēng)單元.潔凈采樣車(chē).吊裝式自?xún)羝?/span>.除塵器

高品質(zhì)高精度-激光塵埃粒子計(jì)數(shù)器.塵埃粒子計(jì)數(shù)器.粒子計(jì)數(shù)器.生物安全柜.潔凈工作臺(tái).超凈工作臺(tái).風(fēng)淋室.風(fēng)淋.壓差計(jì).空氣凈化.凈化設(shè)備.風(fēng)速儀.FFU.潔凈采樣車(chē).過(guò)濾器.Airborne Particle Counter.凈化工作臺(tái).凈化工程.離子風(fēng)蛇.Handheld Laser Particle Counter.風(fēng)量?jī)x.氣溶膠發(fā)生器.溫濕度壓差測(cè)試儀.浮游細(xì)菌采樣器.光度計(jì).通風(fēng)柜.傳遞窗.風(fēng)淋室.環(huán)境檢測(cè)儀.在線分析測(cè)試.多點(diǎn)動(dòng)態(tài)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)系統(tǒng).在線監(jiān)測(cè)系統(tǒng).大流量.蘇凈.粒子發(fā)生器

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