Stbl3 Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品標(biāo)簽：

Stbl3；Stbl2；HB101；Stable；Direct repeats 直接重復(fù)片段；Lentiviral expression vectors 慢病毒表達(dá)載體；In-fusion 一步法克隆檢測(cè)試劑盒；

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產(chǎn)品組分：

菌株描述

Stbl3菌株來源于大腸桿菌HB101菌株，特別適用于克隆不穩(wěn)定插入片段比如含有直接重復(fù)序列的慢病毒DNA。與*0菌株不同，Stbl3菌株減少了存在于慢病毒表達(dá)載體和一些其他腺病毒載體中長(zhǎng)末端重復(fù)序列（LTRs）的同源重組頻率，有效降低錯(cuò)誤重組。Stbl3有更高的基因組克隆容量。此菌株含鏈霉素抗性。

Stbl3菌株基因型：F-mcrB mrrhsdS20(rB-, mB-) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(StrR) xyl-5 λ-leumtl-1

產(chǎn)品描述

本品是Stbl3菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率＞10⁸ cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

注意事項(xiàng)

1）   對(duì)不穩(wěn)定DNA克隆或逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒載體克隆，涂板后應(yīng)在30℃培養(yǎng)，以減少錯(cuò)誤重組的發(fā)生概率。

2）   制備高純度病毒質(zhì)粒，需使用新鮮轉(zhuǎn)化的平板接菌，新鮮菌液提取質(zhì)粒，菌液不可低溫保存后使用。

3）   對(duì)不穩(wěn)定的克隆或病毒質(zhì)粒優(yōu)先以質(zhì)粒狀態(tài)保存，盡量避免以轉(zhuǎn)化在大腸桿菌細(xì)胞的方式保存質(zhì)粒。

4）   轉(zhuǎn)化時(shí)SOC或LB培養(yǎng)基均可用，前者能提高轉(zhuǎn)化效率約20%。

5）   感受態(tài)細(xì)胞必須用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在-80℃保存，不可反復(fù)凍融且放置時(shí)間過長(zhǎng)，否則會(huì)減低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

6）   醉好在冰上融化感受態(tài)細(xì)胞。

7）   進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，需在相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件下進(jìn)行。

8）   為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可保留部分連接反應(yīng)液以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到zui低。

9）   產(chǎn)品包裝內(nèi)含質(zhì)粒pUC19 DNA(10 pg/μl)，供對(duì)照實(shí)驗(yàn)用。

10）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

Stbl3感受態(tài)細(xì)胞常見問題【詳細(xì)問題請(qǐng)見懋康網(wǎng)站MKbio介紹】

1.      使用Stbl3感受態(tài)細(xì)胞時(shí)，如何提高病毒質(zhì)粒的產(chǎn)量？

2.      是否能用*0或DH5α代替Stable或Stbl3擴(kuò)繁病毒質(zhì)粒？

3.        使用Stbl3，*0感受態(tài)細(xì)胞構(gòu)建或擴(kuò)增病毒質(zhì)粒時(shí)，平板上長(zhǎng)出的克隆有的偏大，有的偏小，如何選擇哪種克隆用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)？

4.      Stbl3的基因型為F-mcrB mrrhsdS20(rB-, mB-) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20 (StrR) xyl-5 λ-leu mtl-1，如何理解各個(gè)基因？

5.      轉(zhuǎn)化過程中感受態(tài)細(xì)胞的復(fù)蘇必須使用SOC培養(yǎng)基？

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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Stbl3化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞（不穩(wěn)定DNA轉(zhuǎn)化）

Stbl3化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞（不穩(wěn)定DNA轉(zhuǎn)化）