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F9細(xì)胞;小鼠畸胎瘤細(xì)胞說(shuō)明書

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更新時(shí)間:2017-11-03 14:30:45瀏覽次數(shù):81次

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經(jīng)營(yíng)模式:生產(chǎn)廠家

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所在地區(qū):上海上海市

聯(lián)系人:辛妍 (銷售)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

上海研盟生物提供美國(guó)ATCC傳代細(xì)胞株“F9細(xì)胞;小鼠畸胎瘤細(xì)胞說(shuō)明書",進(jìn)口來(lái)源,國(guó)內(nèi)保種,活性保證,咨詢:.

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產(chǎn)品名稱:F9細(xì)胞;小鼠畸胎瘤細(xì)胞說(shuō)明書

細(xì)胞特性組織來(lái)源:畸胎癌
培養(yǎng)條件:DMEM +10% FBS
形 態(tài):貼壁;上皮細(xì)胞樣
背 景:在維甲酸和聯(lián)丁酰*(cAMP)刺激下,F(xiàn)9細(xì)胞分化成體壁內(nèi)胚層。分化的細(xì)胞合成血漿酶原活化因子、層粘連蛋白和Ⅳ型膠原質(zhì)。只有在經(jīng)過(guò)維甲酸處理后細(xì)胞上的cAMP才有作用。細(xì)胞中有3個(gè)拷貝β1整合素基因。檢測(cè)表明,鼠痘病毒陰性。

含量:>1x10的6次方 個(gè)/mL
污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

基本特性:
C細(xì)胞數(shù)量:1000000個(gè)細(xì)胞數(shù)
E細(xì)胞檢測(cè):細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

凍存和復(fù)蘇原則就是:慢凍、快解凍。因?yàn)榧?xì)胞內(nèi)主要成分還是水,在-20℃時(shí)細(xì)胞中的水結(jié)成冰晶,而與水相比,冰的密度小而體積大,會(huì)造成細(xì)胞器膜、細(xì)胞膜的損傷,這樣很容易導(dǎo)致細(xì)胞復(fù)蘇失敗。

密度超過(guò)90%,并且細(xì)胞狀態(tài)很好時(shí),則復(fù)溫后2個(gè)小時(shí)需要立即傳代,提供復(fù)蘇好的細(xì)胞株,貼壁及懸浮細(xì)胞形式,細(xì)胞狀態(tài)良好,飽滿、光澤度好,*,并提供細(xì)胞報(bào)價(jià)、所需培養(yǎng)基、種屬來(lái)源、組織來(lái)源、形態(tài)、背景資料等。

 
細(xì)胞接受后的處理:
1)收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查是否漏液,如果漏液,請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2)請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3)棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4)如果細(xì)胞長(zhǎng)滿(90%以上)請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5)接到細(xì)胞次日,請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉谩?br /> 
細(xì)胞用途:僅供科研使用。
                       


F9細(xì)胞;小鼠畸胎瘤細(xì)胞說(shuō)明書復(fù)蘇方法

1.從液氮罐中取出安剖;有時(shí)因安剖未封嚴(yán),浸入了液氮,取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸,因此應(yīng)帶有防護(hù)眼睛和手套。

2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上蓋并不時(shí)搖動(dòng),盡快解凍。

3.剪開紗布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,凈化臺(tái)上打開蓋,用吸管吸出細(xì)胞懸液,裝入離心管中,再補(bǔ)加10ml培養(yǎng)液,吹打使細(xì)胞懸浮。

4.低速離心(500~1000轉(zhuǎn)/分)5分鐘,取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗、離心。

5.加入培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后,再移裝入培養(yǎng)瓶中,置溫箱培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。

細(xì)胞分裂間期分有3階段

細(xì)胞從上一次分裂結(jié)束后到下一次分裂開始的一段時(shí)間成為分裂間期。分裂間期以細(xì)胞內(nèi)部DNA合成為依據(jù),又可分為:

1.G1期——DNA合成前期 該期是從上一次細(xì)胞周期完成后開始的,剛形成的兩個(gè)子細(xì)胞,其體積較原有的細(xì)胞小。該期特點(diǎn)是物質(zhì)代謝活躍,迅速合成RNA和蛋白質(zhì),細(xì)胞體積顯著增大。這一期的主要意義在于為下階段S期的DNA復(fù)制作好物質(zhì)和能量的準(zhǔn)備。

細(xì)胞進(jìn)入G1期后,并不是毫無(wú)例外地都進(jìn)入下一期繼續(xù)增殖,在此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)三種不同前景的細(xì)胞:①增殖細(xì)胞:這種細(xì)胞能及時(shí)從G1期進(jìn)入S期,并保持旺盛的分裂能力。例如消化道上皮細(xì)胞及骨髓細(xì)胞等; ②暫不增殖細(xì)胞或休止細(xì)胞:細(xì)胞進(jìn)入G1期后不立即轉(zhuǎn)入S期,在需要時(shí),如損傷、手術(shù)等,才進(jìn)入S期繼續(xù)增殖。例如肝細(xì)胞及腎小管上皮細(xì)胞等;③不增殖細(xì)胞:此種細(xì)胞進(jìn)入G1期后,失去分裂能力,終身處于G1期,zui后通過(guò)分化、衰老直至死亡。例如高度分化的神經(jīng)細(xì)胞、肌細(xì)胞及成熟的紅細(xì)胞等。

2.S期——DNA合成期 S期主要特征是復(fù)制DNA,使DNA含量增加一倍,保證將來(lái)分裂時(shí)兩個(gè)子細(xì)胞的DNA含量不變。從G1期進(jìn)入S期是細(xì)胞周期的關(guān)鍵時(shí)刻,只要DNA的復(fù)制一開始,細(xì)胞增殖活動(dòng)就會(huì)進(jìn)行下去,直到分裂成兩個(gè)子細(xì)胞為止。該期中,如果受到某些因素干擾,會(huì)影響到DNA的復(fù)制,而引起\細(xì)胞的變異或分裂異常終止。

3.G2期——DNA合成后期 此期主要為分裂期做準(zhǔn)備。這一期DNA合成終止,但合成少量RNA和蛋白質(zhì),可能與構(gòu)成紡錘體的微管蛋白有關(guān)

來(lái)源有保障(世界*品牌),狀態(tài)且傳代次數(shù)好,經(jīng)測(cè)試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。每管含有細(xì)胞數(shù)>1000000個(gè),具有高品質(zhì)、高純度、高穩(wěn)定性等特點(diǎn),純化技術(shù)保證產(chǎn)品性能。
運(yùn)輸方式:活細(xì)胞運(yùn)輸(T-25 flasks)。
細(xì)胞純度:95%。
細(xì)胞來(lái)源:ATCC等。
包裝:內(nèi)層無(wú)菌自封袋,防壓泡沫盒,外層防壓保溫氣泡袋,說(shuō)明書。

用途:本產(chǎn)品只提供給進(jìn)一步的科研使用,不可應(yīng)用于治療等其他方面。

細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來(lái),移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時(shí)后.再放入-80度冰箱過(guò)夜,第二天放入液氮罐保存.

 

,體內(nèi)、外細(xì)胞的差異和分化:

1、差異:細(xì)胞離體后,失去了神經(jīng)體液的調(diào)節(jié)和細(xì)胞間的相互影響,生活在缺乏動(dòng)態(tài)平衡相對(duì)穩(wěn)定環(huán)境,日久天長(zhǎng),易發(fā)生如下變化:分化現(xiàn)象減弱;形態(tài)功能趨于單一化或生存一定時(shí)間后衰退死亡;或發(fā)生轉(zhuǎn)化獲得不死性,變成可無(wú)限生長(zhǎng)的連續(xù)細(xì)胞系或惡性細(xì)胞系。因此,培養(yǎng)中的細(xì)胞可視為一種在特定的條件下的細(xì)胞群體,它們既保持著與體內(nèi)細(xì)胞相同的基本結(jié)構(gòu)和功能,也有一些不同于體內(nèi)細(xì)胞的性狀。實(shí)際上從細(xì)胞一旦被置于體外培養(yǎng)后,這種差異就開始發(fā)生了。

2、分化:體外培養(yǎng)的細(xì)胞分化能力并未*喪失,只是環(huán)境的改變,細(xì)胞分化的表現(xiàn)和在體內(nèi)不同。細(xì)胞是否表現(xiàn)分化,關(guān)鍵在于是否存在使細(xì)胞分化的條件,如Friend細(xì)胞(小鼠紅白血病細(xì)胞)在一定的因素作用下可以合成血紅蛋白,血管內(nèi)皮細(xì)胞在類似基膜物質(zhì)底物上培養(yǎng)時(shí)能長(zhǎng)成血管狀結(jié)構(gòu),雜交瘤細(xì)胞能產(chǎn)生特異的單克隆抗體,這些均屬于細(xì)胞分化行為。

注意事項(xiàng)

1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們。

2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

本公司的細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程,供參考
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基(DMEM,GIBCO,貨號(hào)11965-092),90%;胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),先要消化處理并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。消化方法按照細(xì)胞傳代方法的1-3步驟進(jìn)行,zui后的重懸液使用血清。懸浮細(xì)胞直接計(jì)數(shù)后離心,用血清重懸浮,加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。

傳代時(shí)間:2-3天 3-5天

傳代比例:1:2~1:3  1:1~1:2

細(xì)胞活力:95%(Viability by Trypan Blue Exclusion)

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)安全性:所有細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細(xì)胞后,在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

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關(guān)鍵詞:顯微鏡 培養(yǎng)箱
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