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HL-7702細(xì)胞,人肝細(xì)胞

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更新時間：2017-11-03 10:36:18瀏覽次數(shù)：141次

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細(xì)胞

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上海研盟生物科技有限公司

經(jīng)營模式：生產(chǎn)廠家

商鋪產(chǎn)品：9950條

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產(chǎn)品簡介

上海研盟生物提供美國ATCC傳代細(xì)胞株“HL-7702細(xì)胞,人肝細(xì)胞"，進(jìn)口來源，國內(nèi)保種，活性保證，咨詢：.

詳細(xì)介紹

【友情提示】：產(chǎn)品價格與說明書請?zhí)砑涌头騺黼娫儍r，索要說明書；

產(chǎn)品名稱：HL-7702細(xì)胞,人肝細(xì)胞

細(xì)胞特性

組織來源：肝
培養(yǎng)條件：RPMI-1640 +10% FBS
形態(tài)：貼壁；上皮細(xì)胞樣
背景：L-02細(xì)胞建系鑒定于1980年（葉秀珍等，1980)。該細(xì)胞是一株正常肝細(xì)胞系，具有典型的肝細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征，可用于多種實驗研究。

含量：>1x10的6次方個/mL
污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

基本特性：
描述：（1）所有細(xì)胞株購自ATCC；
（2）公司可提供新鮮或凍存細(xì)胞株；
（3）細(xì)胞株數(shù)量約 1000000個/瓶；
（4）不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

密度超過90%,并且細(xì)胞狀態(tài)很好時,則復(fù)溫后2個小時需要立即傳代，提供復(fù)蘇好的細(xì)胞株，貼壁及懸浮細(xì)胞形式，細(xì)胞狀態(tài)良好，飽滿、光澤度好，*，并提供細(xì)胞報價、所需培養(yǎng)基、種屬來源、組織來源、形態(tài)、背景資料等。

細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點：
1. 實驗開始前，無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘*滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺面，并且打開無菌操作臺風(fēng)扇運行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實驗操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基*相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實驗完成后，請將實驗物品拿出工作臺，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個細(xì)胞株的操作。
2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時放置，其它實驗用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作過程應(yīng)在臺面的*無菌區(qū)域內(nèi)完成，請勿在邊緣非無菌區(qū)域進(jìn)行操作。
3. 小心取用無菌實驗物品，避免細(xì)菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開后，請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。
4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進(jìn)行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃壍臒o菌操作臺進(jìn)行（至少是Class II）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。
5. 定期檢測下列項目：
5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力
5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時更換）。
5.3. 無菌操作臺內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時/HEPA）。
6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

細(xì)胞用途：僅供科研使用。

HL-7702細(xì)胞,人肝細(xì)胞復(fù)蘇方法

1．從液氮罐中取出安剖；有時因安剖未封嚴(yán)，浸入了液氮，取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸，因此應(yīng)帶有防護(hù)眼睛和手套。

2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上蓋并不時搖動，盡快解凍。

3．剪開紗布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，凈化臺上打開蓋，用吸管吸出細(xì)胞懸液，裝入離心管中，再補(bǔ)加10ml培養(yǎng)液，吹打使細(xì)胞懸浮。

4．低速離心（500～1000轉(zhuǎn)/分）5分鐘，取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗、離心。

5．加入培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后，再移裝入培養(yǎng)瓶中，置溫箱培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。

我公司認(rèn)為購買細(xì)胞的客戶有培養(yǎng)細(xì)胞的經(jīng)驗，客戶收到細(xì)胞，原瓶里的培養(yǎng)液可以收集繼續(xù)使用，在*次消化傳瓶時，我們要求客戶留一瓶細(xì)胞繼續(xù)使用我們的培養(yǎng)液，其它瓶的細(xì)胞客戶可使用自己的培養(yǎng)液，這樣可減少由于細(xì)胞不適應(yīng)培養(yǎng)液導(dǎo)致的細(xì)胞問題。

來源有保障（世界*品牌），狀態(tài)且傳代次數(shù)好，經(jīng)測試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。每管含有細(xì)胞數(shù)>1000000個，具有高品質(zhì)、高純度、高穩(wěn)定性等特點，純化技術(shù)保證產(chǎn)品性能。
運輸方式：活細(xì)胞運輸（T-25 flasks）。
細(xì)胞純度：95%。
細(xì)胞來源：ATCC等。
包裝：內(nèi)層無菌自封袋，防壓泡沫盒，外層防壓保溫氣泡袋，說明書。

用途：本產(chǎn)品只提供給進(jìn)一步的科研使用，不可應(yīng)用于治療等其他方面。

細(xì)胞凍存
１．將細(xì)胞消化下來，移入離心管離心，棄上清
２．準(zhǔn)備凍存液比例：５０％ＦＢＳ＋４０％培養(yǎng)基＋１０％ＤＭＳＯ（現(xiàn)用現(xiàn)配）
３．加１．５凍存液在離心管中，將細(xì)胞吹打均勻，移入凍存管內(nèi)．
放入－２０度冰箱２－４小時后．再放入－８０度冰箱過夜，第二天放入液氮罐保存.

，動物種別：人

組織來源：肝

形態(tài)：

培養(yǎng)基和添加劑：RPMI-1640(GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, glucose 2.5g/L, Sodium Pyruvate 0.11g/L)，80%；胎牛血清，20%。氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。

REFERENCE：Acta Biol. Exp. Sinica 13(4):361.1980. Acta Cell Biology Sinica 24(5):303-306,2002 Prog. Biochem. Biophys. 29(5):781-785, 2002 Chinese Journal of Cancer, 21(2):207-208, 2002 Chin J Cell Mol Immunol 18(2):146-148,2002 Chin J Cell Mol Immunol 18(5):460-462,2002 China J Cancer Prev Treat 9(3):235-237,2002 Natl Med J China 82(8):558-560,2002 Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology 19(4):518-522,2003 Acta Biochimica et Biophysica Sinica 35(2):161-166,2003 Chin J Oncol. 25(2):152-153,2003 Chinese Journal of Cancer 22(3):248-252,2003 Chinese Journal of Cancer 22(6):561-565,2003 Chin J Cell Med Immunol 19(1):41-44,2003 The FASEB Journal 16:294,2002

注意事項

1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們。

2. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

本公司的細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基(DMEM，GIBCO，貨號11965-092)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，先要消化處理并進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。消化方法按照細(xì)胞傳代方法的1-3步驟進(jìn)行，zui后的重懸液使用血清。懸浮細(xì)胞直接計數(shù)后離心，用血清重懸浮，加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。

傳代時間：2-3天 3-5天

傳代比例：1:2~1:3 1:1~1:2

細(xì)胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

細(xì)胞實驗安全性：所有細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細(xì)胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細(xì)胞生長情況。

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