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PA317小鼠成纖維細胞

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更新時間：2017-10-20 09:51:59瀏覽次數(shù)：235次

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上海研盟生物科技有限公司

經(jīng)營模式：生產(chǎn)廠家

商鋪產(chǎn)品：9950條

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聯(lián)系人：辛妍（銷售）

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產(chǎn)品簡介

上海研盟生物提供美國ATCC傳代細胞株“PA317小鼠成纖維細胞"，進口來源，國內(nèi)保種，活性保證，咨詢：.

詳細介紹

【友情提示】：產(chǎn)品價格與說明書請?zhí)砑涌头騺黼娫儍r，索要說明書；

產(chǎn)品名稱：PA317小鼠成纖維細胞

細胞特性

細胞名稱：PA317 小鼠成纖維細胞
組織來源：胚胎
培養(yǎng)條件：DMEM +10% FBS
形態(tài)：貼壁；成纖維細胞樣
背景：PA317細胞株源自TK- NIH/3T3細胞，通過pBR322中的包裝結(jié)構(gòu)DNA(pPAM3)和pBR322中的單純皰疹病毒胸苷激酶基因共同轉(zhuǎn)染構(gòu)建而成。通過感染或轉(zhuǎn)染將逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導入這些細胞，結(jié)果生成可以感染許多哺乳動物細胞的雙嗜性載體顆粒。這株細胞生成的病毒顆粒已成功地用于將基因?qū)肴祟悺?可能因為用于構(gòu)建這株細胞而轉(zhuǎn)入的DNA丟失，能夠包裝逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的PA317細胞百分比隨傳代而減少。在包含0.03 mM 次, 0.001 mM 氨甲喋呤和0.02 mM 胸苷的培養(yǎng)基中短暫(大約5天)選擇，可以選出保留了包裝功能的細胞。選擇后，細胞應(yīng)在HT培養(yǎng)基(0.03 mM 次,0.02 mM 胸苷)中培養(yǎng)4天，以稀釋殘留的氨甲喋呤。

含量：>1x10的6次方個/mL
污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

基本特性：
描述：（1）所有細胞株購自ATCC；
（2）公司可提供新鮮或凍存細胞株；
（3）細胞株數(shù)量約 1000000個/瓶；
（4）不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌

密度超過90%,并且細胞狀態(tài)很好時,則復溫后2個小時需要立即傳代，提供復蘇好的細胞株，貼壁及懸浮細胞形式，細胞狀態(tài)良好，飽滿、光澤度好，*，并提供細胞報價、所需培養(yǎng)基、種屬來源、組織來源、形態(tài)、背景資料等。

PA317小鼠成纖維細胞復蘇方法細胞用途：僅供科研使用。

1．從液氮罐中取出安剖；有時因安剖未封嚴，浸入了液氮，取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸，因此應(yīng)帶有防護眼睛和手套。

2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上蓋并不時搖動，盡快解凍。

3．剪開紗布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，凈化臺上打開蓋，用吸管吸出細胞懸液，裝入離心管中，再補加10ml培養(yǎng)液，吹打使細胞懸浮。

4．低速離心（500～1000轉(zhuǎn)/分）5分鐘，取上清后再重復用培養(yǎng)液漂洗、離心。

5．加入培養(yǎng)液適當稀釋后，再移裝入培養(yǎng)瓶中，置溫箱培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。

我公司認為購買細胞的客戶有培養(yǎng)細胞的經(jīng)驗，客戶收到細胞，原瓶里的培養(yǎng)液可以收集繼續(xù)使用，在*次消化傳瓶時，我們要求客戶留一瓶細胞繼續(xù)使用我們的培養(yǎng)液，其它瓶的細胞客戶可使用自己的培養(yǎng)液，這樣可減少由于細胞不適應(yīng)培養(yǎng)液導致的細胞問題。

來源有保障（世界*品牌），狀態(tài)且傳代次數(shù)好，經(jīng)測試不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。每管含有細胞數(shù)>1000000個，具有高品質(zhì)、高純度、高穩(wěn)定性等特點，純化技術(shù)保證產(chǎn)品性能。
運輸方式：活細胞運輸（T-25 flasks）。
細胞純度：95%。
細胞來源：ATCC等。
包裝：內(nèi)層無菌自封袋，防壓泡沫盒，外層防壓保溫氣泡袋，說明書。

用途：本產(chǎn)品只提供給進一步的科研使用，不可應(yīng)用于治療等其他方面。

細胞凍存
１．將細胞消化下來，移入離心管離心，棄上清
２．準備凍存液比例：５０％ＦＢＳ＋４０％培養(yǎng)基＋１０％ＤＭＳＯ（現(xiàn)用現(xiàn)配）
３．加１．５凍存液在離心管中，將細胞吹打均勻，移入凍存管內(nèi)．
放入－２０度冰箱２－４小時后．再放入－８０度冰箱過夜，第二天放入液氮罐保存.

本公司的細胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備DMEM培養(yǎng)基(DMEM，GIBCO，貨號11965-092)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，先要消化處理并進行細胞計數(shù)。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進行，zui后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數(shù)后離心，用血清重懸浮，加DMSO至zui終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。

傳代時間：2-3天 3-5天

傳代比例：1:2~1:3 1:1~1:2

細胞活力：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

細胞實驗安全性：所有細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細胞后，在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

研盟生物其他優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品：

小鼠雜交瘤細胞，CD3
小鼠雜交瘤細胞，CD4
小鼠雜交瘤細胞，CD8
小鼠雜交瘤細胞，CHK1
小鼠雜交瘤細胞，CHUK
小鼠雜交瘤細胞，CIB1
小鼠雜交瘤細胞，CK1
小鼠雜交瘤細胞，C-Kit
小鼠雜交瘤細胞，Clenbuterol
小鼠雜交瘤細胞，CRYAB
小鼠雜交瘤細胞，cTnI
小鼠雜交瘤細胞，cTnT2
小鼠雜交瘤細胞，Cytokeratin 5
小鼠雜交瘤細胞，Cytokeratin(Pan)
小鼠雜交瘤細胞，DDR2
小鼠雜交瘤細胞，Desmin
小鼠雜交瘤細胞，Dynamin-1細胞名稱：P815小鼠肥大細胞瘤細胞細胞名稱：PA317 小鼠成纖維細胞
細胞描述：PA317細胞株源自TK- NIH/3T3細胞，通過pBR322中的包裝結(jié)構(gòu)DNA(pPAM3)和pBR322中的單純皰疹病毒胸苷激酶基因共同轉(zhuǎn)染構(gòu)建而成。通過感染或轉(zhuǎn)染將逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導入這些細胞，結(jié)果生成可以感染許多哺乳動物細胞的雙嗜性載體顆粒。這株細胞生成的病毒顆粒已成功地用于將基因?qū)肴祟悺?可能因為用于構(gòu)建這株細胞而轉(zhuǎn)入的DNA丟失，能夠包裝逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的PA317細胞百分比隨傳代而減少。在包含0.03 mM 次黃嘌呤, 0.001 mM 氨甲喋呤和0.02 mM 胸苷的培養(yǎng)基中短暫(大約5天)選擇，可以選出保留了包裝功能的細胞。選擇后，細胞應(yīng)在HT培養(yǎng)基(0.03 mM 次黃嘌呤,0.02 mM 胸苷)中培養(yǎng)4天，以稀釋殘留的氨甲喋呤。 Cells shipped from the ATCC have been selected in medium containing 0.03 mM hypoxanthine, 0.001 mM amethopterin (methotrexate), and 0.02 mM thymidine prior to freezing, and should be grown in HT medium for 4 days after receipt. 此后細胞不需選擇可以穩(wěn)定至少1個月。
動物種別：小鼠
組織來源：胚胎
形態(tài)：成纖維細胞
培養(yǎng)基和添加劑：DMEM培養(yǎng)基(GIBCO,貨號12800017，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。
REFERENCE：Miller AD , Buttimore C . Redesign of retrovirus packaging cell lines to avoid recombination leading to helper virus production. Mol. Cell. Biol. 6: 2895-2902, 1986. PubMed: 3785217 Miller AD . DNA contructs for retrovirus packaging cell lines. US Patent 4,861,719 dated Aug 29 1989 Rosenberg SA , et al. Gene transfer into humans--immunotherapy of patients with advanced melanoma, using tumor-infiltrating lymphocytes modified by retroviral gene transduction. N. Engl. J. Med. 323: 570-578, 1990. PubMed: 2381442 Chin J Cell Mol Immunol 18(2):146-148, 2002 Shanghai Immunol Journal 23(1):16-19,2003