上海邦景實業(yè)有限公司
主營產(chǎn)品: 進口elisa試劑盒,細胞株,細胞系,菌種 |
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參考價 | ¥936-¥2376 |
-
型號
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
100ML | 936元 | 15 瓶 可售 |
500ML | 2376元 | 15 瓶 可售 |
更新時間:2024-03-07 16:53:07瀏覽次數(shù):323
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細胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下:
(1)傳代前在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和生長密度,當細胞生長密度達到80%~90%時,即可進行傳代。
(2)吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次,左右輕輕搖晃后棄掉。
(3)根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶內(nèi)加入適量含EDTA的,一般應覆蓋整個培養(yǎng)瓶底。
(4)把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進行消化,2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進行觀察,當發(fā)現(xiàn)有70%~80%細胞收縮變圓、細胞間隙變大時,再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細胞脫落,然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化,使用吸頭輕輕吹打,混合均勻,以防消化過度。
(5)吸出所有細胞懸液至離心管內(nèi),1000rpm/min離心3~5min。
(6)棄上清,加入適量培養(yǎng)液重懸細胞,輕輕吹打混勻,使細胞均勻分散。
(7)用吸頭吸取適量細胞懸液,以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中,補足培養(yǎng)液,搖勻,放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
(8)根據(jù)細胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間,甚至進行細胞凍存。
產(chǎn)品簡介:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
小鼠結(jié)腸黏膜上皮細胞永生化細胞專用培養(yǎng)基 | 100ML、500ML | BJ-X614 |
細胞培養(yǎng)具體步驟:
一、常用設備
1. 準備室的設備
單蒸餾水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、高壓鍋、儲品柜(放置未消毒物品)、儲品柜(放置消毒過的物品)、包裝臺。配液室的設備:扭力天平和電子天平(稱量藥品)、PH計(測量培養(yǎng)用液PH值)、磁力攪拌器(配置溶液室攪拌溶液)。
2. 培養(yǎng)室的設備
液氮罐、儲品柜(存放雜物)、日光燈和紫外燈、空氣凈化器系統(tǒng)、低溫冰箱(-80℃)、空調(diào)、二氧化碳缸瓶、邊臺(書寫實驗記錄)。
3. 必須放在無菌間的設備
離心機(收集細胞)、超凈工作臺、倒置顯微鏡、CO2孵箱(孵育培養(yǎng)物)、水浴鍋、三氧消毒殺菌機、4℃冰箱(放置serum和培養(yǎng)用液)。
二、無菌操作
(一)無菌室的滅菌
1.定期打掃無菌室:每周打掃一次,先用自來水拖地、擦桌子、超凈工作臺等,然后用3‰來蘇爾或新潔爾滅或0.5%過氧乙酸擦拭。
2.CO2孵箱(培養(yǎng)箱)滅菌:先用3‰新潔爾滅擦拭,然后用75%酒精擦拭或者0.5%過氧乙酸,再用紫外燈照射。
3.實驗前滅菌:打開紫外燈、三氧殺菌機、空氣凈化器系統(tǒng)各20-30分鐘。
4.實驗后滅菌:用75%酒精(3‰新潔爾滅)擦拭超凈臺、邊臺、倒置顯微鏡的載物臺。
細胞培養(yǎng)方法:
01 原代培養(yǎng)操作步驟
原代培養(yǎng)的操作步驟為:取材→分離→培養(yǎng)。
(1)取材:對于不同的組織有不同的取材方法,但均應保持材料的新鮮及嚴格無菌。
注意事項:
(1)嚴格進行無菌操作,所用一切試劑及耗材均應無菌,且須在無菌超凈工作臺中紫外照射30min以上,以免細胞發(fā)生污染。
(2)所用培養(yǎng)液必須適宜細胞生存和生長。來源于不同動物種類、組織類型的細胞,對培養(yǎng)液的要求不一樣,必要時可用預實驗的方法選擇適當?shù)呐囵B(yǎng)液。
(3)胎牛血清對于維持細胞生存,促進細胞生長起著關鍵作用??筛鶕?jù)文獻或預實驗選擇合適的胎牛血清。一旦確定,就應保持用至實驗完成。
(4)消化細胞時應避免消化時間過短導致消化不,收集到的細胞數(shù)量少,或消化時間過長導致細胞成團塊樣絮狀游離,這時的細胞已有損傷或死亡,影響細胞數(shù)量和實驗進度。
(5)細胞離心的時候應避免離心力過小收集的細胞數(shù)量不夠,或離心力過大對細胞產(chǎn)生損傷。離心后的細胞沉淀棄去上清后,應先彈散細胞沉淀,再加入培養(yǎng)液重懸,這樣比直接吹打?qū)毎麚p傷小,可以提高細胞活率。
(6)吹打細胞時應盡量避免細胞的產(chǎn)生,以免損傷細胞,影響細胞狀態(tài)(吹打過程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生)。
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