上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品: 進(jìn)口elisa試劑盒,細(xì)胞株,細(xì)胞系,菌種 |
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公司信息
- 聯(lián)系人:
- 劉小姐
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- 021-57690166
- 地址:
- 上海市閔行區(qū)碧泉路36弄銀宵大廈
- 郵編:
- 200000
- 網(wǎng)址:
- www.bhsy-e.com/
參考價(jià) | ¥2990 |
-
型號(hào)
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
50T | 2990元 | 15 盒 可售 |
更新時(shí)間:2024-01-25 09:01:28瀏覽次數(shù):79
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運(yùn)輸:低溫
保存:-20℃避光
有效期:一年
貨期:2-3周
產(chǎn)品用途:公司產(chǎn)品僅供科研研究實(shí)驗(yàn)
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) | 包裝規(guī)格 |
玉米MON810 PCR檢測(cè)試劑盒 | BJ-P7890 | 50T |
試劑組成:
特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品。
2. 根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測(cè),避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
注意事項(xiàng):
1、所有步驟均應(yīng)在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行,超凈臺(tái)紫外照射至少15min。
2、所有試劑應(yīng)為此實(shí)驗(yàn)專用。
3、使用75%乙醇或其他去污劑擦拭工作臺(tái),避免表面污染。
4、進(jìn)入熒光定量PCR 操作實(shí)驗(yàn)室后需要佩戴一次性無(wú)菌口罩、無(wú)菌乳膠手套、實(shí)驗(yàn)中盡量避免與同事交談,防止PCR 模板污染。
5、實(shí)驗(yàn)中使用各種規(guī)格的離心管,槍頭及配制試劑和溶解沉淀用的水,均應(yīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)處理后使用,以去除吸附的RNA酶污染。
6、使用Trizol試劑時(shí),避免接觸皮膚或衣服。避免吸入蒸氣。
7、qPCR反應(yīng)需要qPCR級(jí)水,試劑和試管。請(qǐng)務(wù)必使用正確類型的qPCR光學(xué)PCR管和蓋子。不可用普通的PCR管。
8、加樣前,先布局,規(guī)劃加樣順序以避免交叉污染。
9、所有實(shí)驗(yàn)應(yīng)均應(yīng)設(shè)置無(wú)模板對(duì)照,其中包含除DNA或cDNA樣品以外的所有反應(yīng)組分。
10、先配制qPCR反應(yīng)混合液,減少誤差。
11、加樣后上機(jī)前,務(wù)必通過(guò)瞬離將反應(yīng)液離至管底,并消除溶液中的氣泡,因?yàn)闅馀輹?huì)干擾熒光檢測(cè)且降低酶活性,從而降低擴(kuò)增效率。
操作流程:
RNA 提取 → 反轉(zhuǎn)錄 → 設(shè)計(jì)引物 → Q-PCR
一、 總RNA提取
A組織樣本:迅速將新鮮的組織切成合適的大小,在液氮中充分研磨后加裂解液裂解,或直接加入裂解液后用勻漿器勻漿。每30-50mg組織加1ml Trizol。
B全血樣品:加入3-5倍體積的紅細(xì)胞裂解液到血樣中,室溫孵育10min,室溫3500rpm離心6min。棄上清,原每2-3ml全血樣品加1mL Trizol。
C細(xì)胞樣品:懸浮液中生長(zhǎng)的細(xì)胞,通過(guò)離心收集細(xì)胞后,每1×105?106細(xì)胞加入1mL Trizol,移液器吹打混勻,直接裂解或-80℃儲(chǔ)存一個(gè)月。貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,有兩種處理方法。一種是移除培養(yǎng)基后,將1mL Trizol直接加入直徑3.5cm的培養(yǎng)皿中裂解細(xì)胞?;蚴窍扔脤①N壁細(xì)胞消化下來(lái)并收集后,再加入1mL Trizol進(jìn)行裂解。(Note:加入Trizol前, PBS充分洗滌細(xì)胞去除殘余培養(yǎng)基。)
二、直接法
1)加入1ml Trizol試劑,混勻,冰上孵育10min。
2)4℃,12000rpm離心10min,小心轉(zhuǎn)移上清液到不含顆粒的新EP管中。
3)加入200ul氯仿,劇烈振蕩15秒,室溫孵育5min。
4)4℃,12000rpm離心15min?;旌弦悍秩龑樱ㄗ钕旅娴穆确掠袡C(jī)相,中間相和上層水相。小心轉(zhuǎn)移上層水相到新的EP管(大約60%體積的Trizol),不要吸取中間相,可留下少量上層液體?。∟ote:質(zhì)量比數(shù)量更重要?。?/span>
5)加入等體積的異丙醇,輕輕地顛倒混勻約10次,室溫放置10min。
6)4℃,12000rpm離心10min。棄上清,1ml 75%乙醇洗滌RNA沉淀兩次。
7)4℃,12000rpm離心5min,棄上清,室溫下風(fēng)干5-10min(不要太干,過(guò)度干燥會(huì)導(dǎo)致RNA難溶解?。?。將RNA溶于15μl-50μlDEPC水中。
8)立即進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng),或先-80℃長(zhǎng)期保存。
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