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DNA 修復(fù)混合液 是根據(jù)體內(nèi)DNA修復(fù)機(jī)制而精心配制的一種雞尾酒式的酶混合試劑,用于在 PCR 反應(yīng)、微陣列分析或其它 DNA 技術(shù)之前,修復(fù)受損的 DNA 模板。作用于多種受損 DNA,包括那些阻礙 PCR 反應(yīng)的損傷 (如:缺嘌呤/缺嘧啶位點(diǎn)、胸腺嘧啶二聚體、切刻和缺口) 和經(jīng)誘導(dǎo)而發(fā)生突變的位點(diǎn) (如:脫氨基胞嘧啶和 8-氧鳥嘌呤) 。此外,它將去除 D
DNA 修復(fù)混合液
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DNA 修復(fù)混合液 | 30次 | 詢價(jià) |
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是根據(jù)體內(nèi)DNA修復(fù)機(jī)制而精心配制的一種雞尾酒式的酶混合試劑,用于在 PCR 反應(yīng)、微陣列分析或其它 DNA 技術(shù)之前,修復(fù)受損的 DNA 模板。作用于多種受損 DNA,包括那些阻礙 PCR 反應(yīng)的損傷 (如:缺嘌呤/缺嘧啶位點(diǎn)、胸腺嘧啶二聚體、切刻和缺口) 和經(jīng)誘導(dǎo)而發(fā)生突變的位點(diǎn) (如:脫氨基胞嘧啶和 8-氧鳥嘌呤) 。此外,它將去除 DNA 3' 末端的多種半基團(tuán)而保留羥基基團(tuán)。它具體有下列特點(diǎn):
1. 用于 PCR 反應(yīng)、微陣列分析和其它DNA技術(shù)
2. 操作簡便
3. 不損傷模板
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相, 離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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