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上海雅吉生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 培養(yǎng)原代細胞,細胞系價格,耐藥細胞株,實時熒光pcr試劑盒 |
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| 參考價 | ￥ 1800 |
| 訂貨量 | 1 |
- 型號
- 品牌
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
- 所在地 上海市
更新時間：2019-05-21 10:04:54瀏覽次數(shù)：108
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產(chǎn)品規(guī)格：1*10^6個細胞/T25
凍存條件:無血清細胞凍存液
氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。
溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%
傳代方法 1:2~1:4傳代
傳代情況： 2天換液
U-CH1人脊索瘤細胞描述：收集瓶子中培養(yǎng)基留作過渡培養(yǎng)細胞鋪板是細胞實驗中常見又必須掌握的一門技術，看似簡單，然而卻經(jīng)常遇到如細胞居中或者中間稀疏等不均勻分布的現(xiàn)象，結果就是只能整板扔掉，重新鋪板，既耽擱時間又浪費了細胞及培養(yǎng)板等資源。歷經(jīng)多次失敗后，你才會發(fā)現(xiàn)，原來細胞鋪板是有規(guī)律可循的，今天我們就聊一聊：細胞鋪板的3種手法。
首先，我們來看看細胞鋪板不均勻的3種常見情況：
1，中間多，周圍少
2，中間少，四周多
3，呈現(xiàn)一坨一坨的狀態(tài)
這么多種不均勻的情況，到底該怎么拯救呢？一起來看看細胞鋪板的三種手法：
手法一：均勻單層
要鋪成那種很均勻的單層細胞，手法如下：
1，細胞板子先加入一定量(一般是總量培養(yǎng)基的1/5)的培養(yǎng)基，放入孵箱中放置10-20min。
2，在滴入細胞時，細胞板子與通風櫥有一定的角度，沿著板壁的孔邊緣滴入。
3，滴入后，呈“8”字方法搖晃5-8次。
4，置于水平臺上，放置10-20分鐘
5，放入孵箱。
在細胞鋪板時，每一種板子的孔面積有多大，培養(yǎng)的液體量以及加入細胞量如下：
手法二：中間少，周圍多
其實細胞鋪板不一定都需要單個單個的那么均勻，比如，做免疫熒光時，學霸姐姐喜歡鋪中間少，周圍稍多的板子，
因為這個樣子可以同時檢測到單個細胞的形態(tài)，另外又可以照一點低倍的用作于統(tǒng)計，所有的細胞都在一個環(huán)境中。
特別說明一下：這里的多也只是相對于多，細胞也是單層的。
中間
周圍
要鋪這樣的細胞樣子，那鋪細胞時要注意手法了：
1，細胞板子不需要提前用培養(yǎng)基潤洗，直接從邊上滴入混有細胞的培養(yǎng)基。
2，放置30s-1min后，前后搖晃5-8次。
3，放在水平臺上靜置2-5min。
4，放入孵箱。
手法三：中間多，周圍少
學一般在提取蛋白或者提取RNA的時候，可以這樣鋪板，因為有些細胞刮刀不好用，沒有辦法刮到周圍的。想要鋪中間多，周圍少的板子，手法如下：
1，細胞板子不需要提前潤洗，從中間滴入進去后。
2，把板子朝一個方向順時針或者逆時針旋轉3-5圈。
3，水平臺上靜置2-5min。
4，放入孵箱。
總結一下：想要細胞鋪板鋪得好，背景知識很重要
其實在鋪細胞的時候，你要準確的知道你所養(yǎng)的細胞的特性，比如：
1，細胞的名稱，來源。
2，細胞的屬性。
3，細胞分裂時間。
還有，主要的是要搞清楚你的細胞的生長曲線，還要知道鋪板后多久可以到達什么細胞密度。
如果你準確的掌握了你的細胞特性，那鋪板是分分鐘搞定的事情。
細胞鋪板后，細胞狀態(tài)不好怎么辦？
如果出現(xiàn)這種情況，學霸姐姐建議你從以下幾個方面考慮一下原因：
1，用來鋪板的細胞狀態(tài)本身就不好。
2，用來鋪板的細胞傳代次數(shù)太多，有些老化。
3，胰酶消化時間過長。
4，中和的血清量及時間不夠。
5，支原體污染。
U-CH1人脊索瘤細胞鋪板是一個經(jīng)驗積累的過程，你的手法也需要積極的改進，不要生搬硬套，也不要一味追求的鋪均勻，在實驗過程中多思考細胞本身的特征和屬性，出現(xiàn)問題積極解決即可。
