目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>脂肪酸代謝系列>> 脂肪酶(LPS)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法
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更新時(shí)間:2023-12-26 20:10:21瀏覽次數(shù):604評(píng)價(jià)
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貨號(hào) | BK-01S6640 |
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實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱(chēng)取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱(chēng):脂肪酶(LPS)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
檢測(cè)方法:可見(jiàn)分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6640
產(chǎn)品分類(lèi):脂肪酸代謝系列
商品介紹:
測(cè)定意義: LPS又稱(chēng)甘油酯水解酶,催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油(或者甘油二酯和單酯)。LPS廣泛的存在于各種生物中。對(duì)于人來(lái)說(shuō),主要是胰脂肪酶,分解食物中脂肪形成單酰甘油和游離脂肪酸,被人體吸收并重新合成脂肪。外源性脂質(zhì)攝入過(guò)多是引發(fā)肥胖的重要原因,血清中LPS的異常增高常見(jiàn)于胰腺炎和胰腺癌。 測(cè)定原理 LPS催化油酯水解成脂肪酸,利用銅皂法測(cè)定脂肪酸生成速率,即可計(jì)算LPS活性。 實(shí)驗(yàn)中所需儀器和用品 甲苯、無(wú)水乙醇、研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、震蕩混勻器、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍和雙蒸水。 |
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類(lèi)常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。 |
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基管 20ml*10支
5g 天狼猩紅 Sirius Rosa BB 室溫保存
50T 鴨肝炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
200 mL 人 NK 細(xì)胞分離液1.062 Cell Separation Solution -20℃保存
100mL HEPES Buffer,0.5M,pH7.6 HEPES Buffer,0.5M,pH7.6 常溫保存
5mL dNTP溶液,10 mM dNTP Solution,10 mM -20℃保存
2 ug pLP VSV-G pLP VSV-G 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
十六烷基瓊脂 Cetrimide Agar 250g
1瓶 MKN-28細(xì)胞株 MKN-28 低溫運(yùn)輸和保存
Korser氏枸椽酸鹽肉湯 Korser Citrate Sodium Broth 100g
100g 瓊脂糖 Agarose 4℃保存
脂肪酶(LPS)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法Trypsin Inhibitor/CRISP8 胰蛋白抑制劑抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-SEK1/MKK4 (Thr261) 磷酸化絲裂原活化蛋白激激4抗體 規(guī)格: 0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的羊抗兔IgG 規(guī)格: 0.1mlphospho-CTNNBIP1 (Thr43/Ser50) 磷酸化β鏈接素相互作用蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
RASSF2 Ras相關(guān)結(jié)構(gòu)域蛋白質(zhì)2抗體 規(guī)格: 0.2mlPLAG1 多型性瘤基因1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
C1orf187 1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框187抗體 規(guī)格: 0.2mlCD45/B220 白細(xì)胞共同抗原抗體 規(guī)格: 0.1ml
KIZUNA/C20orf19 20號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框19抗體 規(guī)格: 0.2mlCD36/PAS-4 CD36抗體 規(guī)格: 0.1ml
PSAP/PAP 前列酸性磷酸抗體 規(guī)格: 0.1mlEAAT3 膠質(zhì)細(xì)胞谷運(yùn)載蛋白3抗體(神經(jīng)/上皮細(xì)胞谷運(yùn)載蛋白) 規(guī)格: 0.1ml
UEVLD/UEV3 泛素結(jié)合E2樣蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlSLC27A2/ACSVL1 鏈脂肪酸輔A連接抗體 規(guī)格: 0.2ml
FANCD2 FANCD2抗體 規(guī)格: 0.1mlNucleoprotein TPR 核蛋白易位啟動(dòng)子區(qū)域TPR抗體 規(guī)格: 0.2ml
CD22/BLCAM B淋巴細(xì)胞粘附分子CD22抗體 規(guī)格: 0.1mlC13orf38/LOC728591 13號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框38抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-p63 (Ser455) 磷酸化P63瘤抑制基因抗體 規(guī)格: 0.1mlPKC alpha 蛋白激C α抗體 規(guī)格: 0.2ml
GLP-1R 樣肽-1受體抗體 規(guī)格: 0.1mlFLIP/c FLIP 凋亡調(diào)節(jié)基因之一抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-DAG1 (Tyr892) 磷酸化肌萎相關(guān)蛋白DAG1抗體 規(guī)格: 0.1ml
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)