目錄:上海帛科生物技術有限公司>>生化檢測試劑盒>>糖酵解系列>> 果糖1,6二磷酸醛縮酶(FBA)測試盒微量法
貨號 | BK-01S6619 |
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本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數(shù)據(jù)!
產品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
果糖1,6二磷酸醛縮酶(FBA)測試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6619 |
商品介紹:
測定意義: 植物葉綠體中果糖1,6-二磷酸醛縮酶是光合作用中參與calvin循環(huán)的重要酶。催化果糖1,6-二磷酸和景天庚酮糖1,7-二磷酸的合成反應,在各種逆境脅迫下表現(xiàn)不同的響應。 測定原理 果糖1,6-二磷酸醛縮酶催化果糖1,6-二磷酸生成3-磷酸甘油醛和磷酸二羥丙酮,在磷酸丙糖異構酶和α-磷酸甘油脫氫酶作用下催化NADH和磷酸二羥丙酮生成NAD和α-磷酸甘油,340nm處吸光值的變化可反映果糖1,6-二磷酸醛縮酶活性的高低。 自備實驗用品及儀器 天平、震蕩儀、低溫離心機、研缽、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板(UV板)。 |
試劑組成和配制:
提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
實驗結果判斷我有妙招:
1、定量測定結果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣,水發(fā)生反應的物質要密封,并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。
操作步驟:
1. 樣品的準備:
a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
1瓶 Ana-1細胞株 Ana-1 低溫運輸和保存
10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基顆粒 10% Trypticase Soy Broth 225ml/袋*10
50次 DOP-PCR試劑盒 DOP-PCR Kit -20℃保存
500mL MOPS-EDTA-Sodium Acetate Buffer (MESA),10X MOPS-EDTA-Sodium Acetate Buffer (MESA),10X 常溫保存
20次 DNA粘轉平試劑盒 DNA Polishing Kit -20℃保存
2 ug pMIG-PP2A-Abeta pMIG-PP2A-Abeta 低溫運輸,-20℃保存
牛膽鹽 Bile Salt 100g
1瓶 SK-MES-1細胞株 SK-MES-1 低溫運輸和保存
腦心浸出液肉湯(BHI)GB標準 Brain Heart Influsion Broth 250g
50mL 二甲基亞砜 ( 細胞培養(yǎng)級 ) Dimethyl Sulfoxide(DMSO) 室溫干燥避光保存
50T 登革熱病毒Ⅰ、Ⅱ型分型PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
果糖1,6二磷酸醛縮酶(FBA)測試盒微量法TNFR2/TRAF2/CD120b 瘤壞死因子受體相關因子2抗體 規(guī)格: 0.1mlUTS2R/GPCR GPR14 G蛋白偶聯(lián)受體14抗體 規(guī)格: 0.1ml
ATP6V1G2/V-ATPase G2 離子轉運ATP合成6G抗體 規(guī)格: 0.2mlLigamentum Nuchae Elastin 項韌帶彈性蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
UBCH6/UBE2E1 泛素蛋白連接E1抗體 規(guī)格: 0.2mlsVEGFR2 可溶性管內皮生因子受體2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-MKK3(Ser189)/MKK6(Ser207) 磷酸化絲裂原活化蛋白激MKK3/6抗體 規(guī)格: 0.1mlMARCH11 膜相關環(huán)指蛋白11抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-GAB2(Ser623) 磷酸化接蛋白Gab2抗體 規(guī)格: 0.1mlPACRG 麻瘋和帕金森氏共同調節(jié)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
NOX4/NADPH oxidase 4 NADPH氧化4抗體 0.1ml
Rabbit anti-Avidin whole serum 兔抗親和素抗清 規(guī)格: 1ml
PGCP 漿谷羧肽抗體 規(guī)格: 0.2ml
XDH/Xanthine Oxidase 氧化抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-MK IgM/Cy5.5 Cy5.5標記的兔抗猴IgM 規(guī)格: 0.1ml
Socs 1 細胞因子信號傳導抑制蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
RENT1/hUPF1 ATP依賴解旋RENT1抗體 規(guī)格: 0.2ml