目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>基因檢測(cè)PCR試劑盒>>RNA/DNA提取試劑盒>> 超級(jí)雜交液
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更新時(shí)間:2024-01-01 15:57:59瀏覽次數(shù):439評(píng)價(jià)
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PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?/span>4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。產(chǎn)品僅用于科研
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱:超級(jí)雜交液
產(chǎn)品規(guī)格: 詳見說明
產(chǎn)品貨號(hào):BK-P96696
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè);
◇高通量:多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1. 使用化學(xué)修飾的熱啟動(dòng)聚合酶,反應(yīng)特異性高,*程度地避免了非特異擴(kuò)增;
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應(yīng)靈敏快速,40個(gè)循環(huán)只需20多分鐘;
3. 抗干擾能力強(qiáng),反應(yīng)重復(fù)性高,適合對(duì)土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進(jìn)行檢測(cè)分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
特異性熒光標(biāo)記:
TaqMan法
TaqMan探針的特性:
(1)5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)(Reporter, R),如FAM、VIC等
(2)3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) (Quencher, Q)
(3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ,無熒光, R與Q分開,發(fā)熒光
(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針
相對(duì)定量通過內(nèi)標(biāo)定量:
內(nèi)標(biāo)(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定,受環(huán)境因素影響小,內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括絕對(duì)定量和相對(duì)定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的絕對(duì)定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
酸激酶 Pyruvate Kinase from rabbit muscle 9001-59-6 1KU 通用試劑 小鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)ELISA試劑盒 ,英文名: a-Glu ELISA Kit
原B1(標(biāo)準(zhǔn)品)Procyanidin B1質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥95%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠乙酰輔酶A羧化酶α(ACACα)ELISA試劑盒 ,英文名: ACACα ELISA Kit ELISAKitTIMP-1豬基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1規(guī)格:48T/96T
順式-格列美脲cis-Glimepiride質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口 兔子Ⅲ型膠原(ColⅢ)ELISA檢測(cè)試劑盒rabbitCollageypeⅢ,ColⅢELISAKIT 96T/48T Humandopamine-β-hydroxylase,DBHELISAKit人多巴胺-β羥化酶(DBH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
反式-羧基格列美脲trans-Carboxy Glimepiride質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口 犬骨橋素(OPN)試劑盒 Canine Osteopoin ELISA Kit 人胎盤堿性1酸酶(PLAP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
灰黃霉素-13C,d3Griseofulvin-13C,d3質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口 英文名稱HumanFDPELISAKit人纖維蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)規(guī)格:96T/48T 豬C肽(C-Peptide)試劑盒 Pig C-Peptide ELISA Kit
頭孢唑啉鈉質(zhì)量規(guī)格:>95%,BRCefazolin ELISAKitCMR人協(xié)同刺激分子受體規(guī)格:48T/96T 嘌呤核苷酸1酸化酶(PNP)ELISA試劑盒 ,英文名: PNP ELISA Kit
頭孢氨芐(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Cephalexin 小鼠谷酸半胱酸連接酶催化亞基(GCLC)ELISA試劑盒 ,英文名: GCLC ELISA Kit Rabbitlipoprotein-associatedphospholipaseA2,Lp-PL-A2ELISA試劑盒兔子脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
赤霉素GA3質(zhì)量規(guī)格:>90%,BRGibberellic acid(GA3 ) 人N-乙?;?/span>-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯氨酸(AcSDKP)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanN-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro,AcSDKPELISAKit 96T/48T Humanai-ophoblastaibody,ATAELISA試劑盒人抗滋養(yǎng)膜細(xì)胞抗體(ATA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
超級(jí)雜交液氯霉素質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRChloramphenicol 大鼠生長分化因子15(GDF15)試劑盒 Rat growth differeiation factor 15,GDF15 ELISA Kit HumancoagulationfactorⅫ,FⅫELISAKit人凝血因子Ⅻ(FⅫ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
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