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當(dāng)前位置:西安百螢生物科技有限公司>>抗體標(biāo)記>> 1299ReadiLink FITC抗體標(biāo)記試劑盒

ReadiLink FITC抗體標(biāo)記試劑盒

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產(chǎn)品型號(hào)1299

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所  在  地西安市

更新時(shí)間:2024-01-30 16:23:06瀏覽次數(shù):92次

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ReadiLink FITC抗體標(biāo)記試劑盒 iFluor 和mFluor-抗體綴合物可用于免疫熒光染色,熒光原位雜交,流式細(xì)胞術(shù)和其他生物學(xué)應(yīng)用。

ReadiLink FITC抗體標(biāo)記試劑盒提供了一種以微觀方式標(biāo)記抗體的方法。該試劑盒僅需要兩個(gè)簡單的混合步驟而無需純化步驟。 試劑盒中使用的iFluor 和mFluor 染料的琥珀酰亞胺酯(SE)顯示出與蛋白質(zhì)的脂族胺的良好反應(yīng)性和選擇性,并形成羧酰胺鍵,其與天然肽鍵相同且穩(wěn)定。 iFluor 和mFluor-抗體綴合物可用于免疫熒光染色,熒光原位雜交,流式細(xì)胞術(shù)和其他生物學(xué)應(yīng)用。 每個(gè)ReadiLink 抗體標(biāo)記試劑盒都提供了進(jìn)行兩次偶聯(lián)反應(yīng)(2x50μg蛋白質(zhì))的所有必需成分。 每個(gè)試劑盒可用于標(biāo)記50-100μg單克隆,多克隆抗體或其他蛋白質(zhì)(> 10 kDa),只需兩個(gè)簡單的混合步驟。ReadiLink FITC抗體標(biāo)記試劑盒是美國AAT Bioquest研發(fā)的產(chǎn)品。

標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(標(biāo)記50μg蛋白質(zhì))

將所有組分加熱并在打開前將樣品瓶短暫離心,并在開始結(jié)合前立即準(zhǔn)備所需的溶液。 以下SOP是標(biāo)記抗HDAC IgG抗體的實(shí)例。

1.準(zhǔn)備蛋白質(zhì)溶液(溶液A):

為了標(biāo)記50g蛋白質(zhì)(假設(shè)目標(biāo)蛋白質(zhì)濃度為1mg / mL),將5L(總反應(yīng)體積的10%)的反應(yīng)緩沖液(組分B)與50L目標(biāo)蛋白質(zhì)溶液混合。

注1.如果您的蛋白質(zhì)濃度不同,請(qǐng)相應(yīng)調(diào)整蛋白質(zhì)體積,使~50μg蛋白質(zhì)可用于標(biāo)記反應(yīng)。

注2:為了標(biāo)記100g蛋白質(zhì)(假設(shè)目標(biāo)蛋白質(zhì)濃度為1mg / mL),將10μL(總反應(yīng)體積的10%)反應(yīng)緩沖液(組分B)與100μL目標(biāo)蛋白質(zhì)溶液混合。

注3:蛋白質(zhì)應(yīng)溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中;如果蛋白質(zhì)溶解在*氨酸緩沖液中,必須用1X PBS(pH 7.2-7.4)透析,或使用Amicon Ultra-0.5,Ultracel-10膜,10 kDa(來自Millipore的cat#UFC501008)去除廣泛用于蛋白質(zhì)沉淀的游離胺或銨鹽(如硫酸銨和乙酸銨)。

注4:不純抗體、牛血清白蛋白(BSA)或明膠穩(wěn)定的抗體不會(huì)被很好地標(biāo)記。

注5:如果蛋白質(zhì)濃度小于1 mg / mL,則結(jié)合效率顯著降低。為獲得標(biāo)記效率,建議終蛋白質(zhì)濃度范圍為1-2 mg / mL。

2.運(yùn)行結(jié)合反應(yīng):

2.1將蛋白質(zhì)溶液(溶液A)加入一瓶標(biāo)記染料(組分A)中,通過反復(fù)移液幾次將其混合均勻,或?qū)⑿∑繙u旋幾秒鐘。

注意:使用標(biāo)記染料的兩個(gè)小瓶(組分A)通過將100μg蛋白質(zhì)分成2x50μg蛋白質(zhì)并使每個(gè)50μg蛋白質(zhì)與一小瓶標(biāo)記染料反應(yīng)來標(biāo)記100μg蛋白質(zhì)。 將兩個(gè)小瓶合并用于下一步。

2.2將綴合反應(yīng)混合物在室溫下保持30-60分鐘。

注意:如果需要,可以旋轉(zhuǎn)或搖動(dòng)綴合反應(yīng)混合物更長的時(shí)間。

3.停止共軛反應(yīng):

3.1添加5 L(對(duì)于50μg蛋白質(zhì))或10L(對(duì)于100μg蛋白質(zhì)),其為TQ染色猝滅緩沖液(組分C)的總反應(yīng)體積的10%到綴合反應(yīng)混合物中(來自步驟2.2),將它們混合 好。

3.2在室溫下孵育10分鐘。

3.3標(biāo)記的蛋白質(zhì)(抗體)現(xiàn)在可以使用了。




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