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Hepes緩沖液配置方法
點擊次數(shù)：1020 發(fā)布時間：2014-1-20
HEPES是一種非離子兩性緩沖液,其在pH 7.2 - 7.4 范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力。其zui大優(yōu)點是在開放式培養(yǎng)或細胞觀察時能維持較恒定的PH值.在這種培養(yǎng)條件下,細胞培養(yǎng)瓶的蓋子應(yīng)擰緊,以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中.大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為pH指示劑,酸性培養(yǎng)液呈橙黃色,堿性培養(yǎng)液呈深紅色.HEPES有些昂貴,在高濃度時對一些細胞可能有毒. 原則上,HEPES作為緩沖劑可用來代替碳酸氫鹽，以解除需要高濃度CO2培養(yǎng)環(huán)境的限制.實際操作中并非如此簡單. 溶解的CO2與碳酸氫鹽對良好的細胞生長也是很重要的。
化學(xué)名：2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonic acid
中文名：羥乙基哌嗪乙硫磺酸
分子式：C8H18N2O4S
HEPES使用方法有兩種：
(1)HEPES可按所需的濃度直接加入到配制的培養(yǎng)液中,再過濾除菌.每1000ml培養(yǎng)液中加入2.38克HEPES,待溶后用lN NaOH 調(diào)pH至7.2,濾過除菌后使用.此時HEPES的使用濃度為10 mmol/L.
(2)亦可配成 100 x 貯存液(l mol/L)，使用前取 99ml培養(yǎng)液加入 lml貯存液，zui終應(yīng)用濃度仍為10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES貯存液配制方法:取23.8g HEPES溶于90ml雙蒸水中,用lN NaOH調(diào)pH至7.5一8.0,然后用水定容至100ml,過濾除菌,分裝小瓶(2ml/瓶),4℃或-20℃保存.