高保留轉(zhuǎn)錄因子抗體相關(guān)信息

常用梯度洗脫法如下： 
（1）層析柱用0.01mol/L、pH7.2PB平衡，標(biāo)記物上柱后，先用0.01mol/L、pH7.2PB洗脫，洗出無(wú)色或淡綠色液體，洗脫液量（根據(jù)床體積大小每梯度乘3），然后依下列各種離子強(qiáng)度洗脫液， 
分別洗脫和收集： 
0.01mol/L、pH7.2PBS（0.05mol/L NaCl）……洗脫部分1。 
0.01mol/L、pH7.2PBS（0.01mol/L NaCl）……洗脫部分2。 
0.01mol/L、pH7.2PBS（0.02mol/L NaCl）……洗脫部分3。 
將此三部分收集液（每管5ml）分別測(cè)定其F/P比值，0.05mol/L NaCl pH7.2PB洗脫液280nm光密度高峰管合并，濃縮保存?zhèn)溆?。因這部分非特異性染色熒光zui少，是比較好的熒光抗體。其他兩部分可以廢棄。 
（2）柱上吸附的過(guò)度標(biāo)記蛋白可繼續(xù)增加NaCl的濃度至 
2.0mol/L洗脫完。 
經(jīng)過(guò)DEAE-纖維素層析后的標(biāo)記抗體，其抗體量一般約損失50%，因此有些要求不太高的抗體，如抗細(xì)菌熒光抗體，不一定要這樣處理，可用染色效價(jià)測(cè)定的稀釋法除去非特異性染色。 
（五）熒光抗體稀釋法 
先測(cè)定熒光抗體特異性染色與非特異性染色的效價(jià)，若二者效價(jià)相差較大，則可將熒光抗體稀釋至一臨界濃度，使特異性染色呈陽(yáng)性，而使非特異性染色保持陰性，稀釋方法和染色效價(jià)測(cè)定方法相同。 
（六）純化抗原法 
用各種方法提純單一成分的抗原是產(chǎn)生單價(jià)特異性抗體的zui主要條件。近代免疫化學(xué)技術(shù)（免疫吸收法）和柱層析法等提供了很大的可能性，可參考有關(guān)專著。 
（七）純化抗體法---免疫吸收法 
例如抗IgA血清的純化方法---免疫吸收法。如分泌型IgA（ SIgA）抗原純度不高，所制的抗血清常與IgG呈交叉反應(yīng)，為此需要吸收，常采用純化的人IgG戊二醛聚合物加以吸收純化。方法如下：  高保留轉(zhuǎn)錄因子抗體相關(guān)信息 
1．人IgG聚合物的制備　　在5ml含40mg/ml人IgG的0.1mol/L pH7.0磷酸緩沖溶液中，加入2.5%戊二醛溶液1ml，邊加邊攪，5min即出現(xiàn)混濁，逐現(xiàn)大塊膠塊，放置30min后，用研缽將凝膠磨細(xì)，繼用1.0mol/L pH7.0磷酸緩沖溶液反復(fù)洗滌3次，末次加蒸餾水至20ml，即為人IgG聚合物懸液。 
2．免疫吸收法　　將待吸收的抗SIgG血清加入待量IgG聚合物懸液，置室溫?cái)嚢?/span>60min,離心沉淀，上清液即稀釋1倍的純化抗SIgA血清。如用IgG聚合物作少量分次吸收，其效果更好。 
（八）伊文氏藍(lán)（Evans blue）襯染法 
用0.01%伊文氏藍(lán)的0.01mol/L pH7.2PBS稀釋熒光抗體，可將背景細(xì)胞和組織染色，呈紅色熒光，與特異性黃綠色熒光形成鮮明的對(duì)比，減少了非特異性熒光，宜作常規(guī)應(yīng)用。伊文氏藍(lán)一般先配成1%溶液，保存于4℃，用前再稀釋至0.01%用以 
和然釋熒光抗體。 
此外，還可以用*消化組織切片或用10%牛血清蛋白封閉法等消除非特異性染色，提高特異性染色。