牛磷酸果糖激酶（PFK）免疫組化試劑盒 ，（更多資訊說(shuō)明書價(jià)格等請(qǐng)?jiān)斍槲夜?/span>）實(shí)驗(yàn)步驟建議方案：
石蠟包埋組織切片3~4μm 厚度
1.烤片： 將待做切片置于切片架上，于60℃恒溫烤箱中至少烤1 hr；
2.脫蠟： 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次
10 min；
3.水化： 切片經(jīng)下行酒精水化，無(wú)水乙醇5min，95%乙醇2 次（每次2min），85%
乙醇2 min；75%乙醇2min，自來(lái)水沖洗，ddH2O 洗2×2min；
4.抗原修復(fù)： 根據(jù)抗體說(shuō)明書*方法進(jìn)行抗原修復(fù)，常采用高壓、微波（溫
度達(dá)到98~100℃）或酶消化修復(fù)法，室溫自然冷卻，自來(lái)水沖洗，ddH2O 洗2×
2min，TBS 洗滌（2×2min）（具體修復(fù)方法見(jiàn)附1）* 注：有些抗原勿需修復(fù)，
直接進(jìn)入第5 步封閉。
5.封閉： 滴加試劑B，37℃濕盒孵育30 min；
6.加一抗：滴加用試劑C（即用型一抗），37℃濕盒孵育2 hr 或4℃過(guò)夜；
7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
8.封閉： 滴加試劑B，37℃濕盒孵育10 min；
9.加二抗： 滴加用抗體稀釋液稀釋的*化二抗（試劑D），37℃濕盒中孵育
30 min；
10.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
11.封閉： 滴加試劑Tween 20，37℃濕盒孵育封閉20 min；
12.加HRP-SA： 滴加用試劑C 稀釋的試劑E（1：50~200，終濃度5~20 nM），37
℃濕盒中孵育30 min；
13.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）；
14.顯色：應(yīng)用DAB 溶液（試劑F）顯色；
15.復(fù)染：自來(lái)水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明；
16.封片： 待組織標(biāo)本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；
17.觀察成像： 顯微鏡下觀察成像。
牛磷酸果糖激酶（PFK）免疫組化試劑盒 ，注意事項(xiàng)：
1. 修復(fù)后緩沖液須自然冷卻，自來(lái)水沖洗后方能把切片取出，驟冷有可能導(dǎo)致
結(jié)晶或抗原封閉。
2. 緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到，用過(guò)的檸檬酸緩沖液不能反復(fù)使
用。
3. 若試劑為微量濃縮液，用前應(yīng)低速離心，將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。
4. 封片前一定要換用TBS 充分洗滌，以便洗去組織上殘留的Tween 20，否則會(huì)
影響結(jié)果觀察。
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