血清主要作用
1、提供基本營養(yǎng)物質:氨基酸、維生素、無機物、脂類物質、核酸衍生物等,是細胞生長必須的物質。
2、提供激素和各種生長因子:胰島素、腎上腺皮質激素、類固醇激素(雌二醇、睪酮、孕酮)等。生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。
3、提供結合蛋白:結合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質,如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等,轉鐵蛋白攜帶鐵。結合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用。
4、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷。
5、對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用:有一些細胞,如內皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現的,現在則有目的的使用血清來終止*的消化作用。因為*已經被廣泛用于貼壁細胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保護細胞免受機械損傷,特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時,粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子,他們在代謝解毒中起重要作用,如SeO3,硒等
常見問題保存血清的方法
血清應保存在-5C至-2OC。然而,若存放于4C時,請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶,建議將無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。
如何解凍血清才不會使產品質量受損?
將血清從冷凍箱取出后,先置于2-8C冰箱使之溶解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。
如何避免沉淀物的產生
1、解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-2O。C至4。C至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20。C至37。C),實驗顯示非常容易產生沉淀物。
2、解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生
3、請勿將血清置于37。C太久。若在37。C放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。
4、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
5、若必須做血清的熱滅活,請遵守56。C,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。 血清解凍后發(fā)現有絮狀沉淀物出現,該如何處理? 欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞過濾膜。
何謂熱滅活?
一般是以56C,30分鐘來處理已解凍的血清,因為此加熱步驟,可以使補體去活化,而補體所參與的反應有:溶細胞活性,平滑肌的收縮,肥大細胞和血小板組胺的釋放,增強吞噬作用,淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和激活。
有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察,像是 "小黑點",常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37C環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
因此我們建議您,若非必須,您可以不需要做熱處理這一步。如此一來,不但節(jié)省您寶貴的時間,更確保您血清的質量!另外,購買已滅活成品也不失一個捷徑,請在購買的時候注意詢問廠家是否是已滅活血清。