一、實(shí)驗(yàn)原理：

蘇木素（Hematoxylin）－伊紅（Eosin）染色法，簡稱HE染色法。

HE染色法采用兩種染料即堿性染料蘇木素和酸性染料伊紅分別于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)發(fā)生作用，使細(xì)胞的微細(xì)結(jié)構(gòu)通過顏色而改變它的折光率，從而在光鏡下能清晰地呈現(xiàn)出細(xì)胞圖像。該染色過程既有化學(xué)反應(yīng)，又有物理作用參與。從化學(xué)反應(yīng)看，組織細(xì)胞內(nèi)含有酸性物質(zhì)和堿性物質(zhì)，細(xì)胞的酸性物質(zhì)與堿性染料的陽離子結(jié)合，而細(xì)胞核的堿性物質(zhì)與酸性染料的陰離子結(jié)合，使其中酸性細(xì)胞核被堿性的蘇木素染成藍(lán)色，而堿性的胞漿被酸性染料伊紅染成紅色。其結(jié)果胞核呈藍(lán)色，胞漿呈紅色。從物理現(xiàn)象看，主要有吸附、吸收之說。HE染色提供良好的核漿對比染色，是細(xì)胞化學(xué)染色zui常用的一種方法。

二、實(shí)驗(yàn)用品：

（1）固定液：常用95％乙醇和冰丙酮

（2）蘇木精染液：稱取蘇木精粉0.5g，銨礬24g溶解于70ml蒸餾水中，然后取NaIO 31g，水5ml，再加入干油30ml和冰醋酸2ml，混合均勻，濾紙過濾，備用。

（3）伊紅染液：稱取0.5g水溶性伊紅染液，溶于100ml蒸餾水中。

（4）*乙醇溶液：用75%乙醇配制1％鹽酸。

（5）系列濃度的乙醇、二甲苯、中性樹膠。

（6）培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、*、蓋玻片、載玻片、顯微鏡。

三、實(shí)驗(yàn)步驟：

（1）樣品制備：對于貼壁生長細(xì)胞，*消化，調(diào)整細(xì)胞濃度約1×105/ml，滴加于蓋玻片上（置于6孔板中），培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間后，取出細(xì)胞爬片，用PBS洗滌3次。

（2）樣品固定：95％乙醇固定20min，PBS洗滌2次，每次1min。

（3）染核：蘇木素染液染色2－3min，自來水洗滌。

（4）分色：鏡下觀察，若細(xì)胞核染色過深，用1％鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒，自來水洗滌。

（5）染胞質(zhì)：浸入伊紅染液染色1min，自來水洗滌。 吹干或自然晾干細(xì)胞爬片后，中性樹膠封片。 若細(xì)胞用4％多聚甲醛固定，則染色時(shí)間相應(yīng)延長，蘇木素染色12-15min，伊紅5min即可。