次氯酸根陰離子（ClO-）及其質(zhì)子化形式次氯酸（HClO）是生物系統(tǒng)中的關(guān)鍵活性氧（ROS）。次氯酸鹽（次氯酸）的不受控制的生產(chǎn)會(huì)導(dǎo)致組織損傷和疾病，包括關(guān)節(jié)炎，腎衰竭和癌癥。此外，次氯酸鈉（NaClO）已廣泛用作我們?nèi)粘Ｉ钪杏糜诒砻媲鍧?，除臭和水消毒的漂白劑。暴露于大量的次氯酸鈉會(huì)導(dǎo)致中毒，癥狀包括嚴(yán)重的呼吸問題，胃部刺激，皮膚和眼睛發(fā)紅和疼痛。因此，高選擇性和靈敏的次氯酸鹽（次氯酸）檢測(cè)具有毒理學(xué)和環(huán)境重要性。Amplite™熒光次氯酸鹽（次氯酸）分析試劑盒提供了一種靈敏的基于熒光的分析方法，可高度特異性地測(cè)量次氯酸鹽（次氯酸）。與次氯酸鹽（次氯酸鹽）選擇性反應(yīng)后，弱熒光的Oxirite™次氯酸鹽傳感器會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)熒光的產(chǎn)品，其熒光增強(qiáng)作用會(huì)超過100倍。熒光信號(hào)可以通過熒光酶標(biāo)儀讀取。使用該熒光次氯酸鹽（次氯酸）分析試劑盒，在100 µL反應(yīng)體積中可檢測(cè)到低至0.4 µM次氯酸鹽。與次氯酸鹽（次氯酸鹽）選擇性反應(yīng)后，弱熒光的Oxirite™次氯酸鹽傳感器會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)熒光的產(chǎn)品，其熒光增強(qiáng)作用會(huì)超過100倍。熒光信號(hào)可以通過熒光酶標(biāo)儀讀取。使用該熒光次氯酸鹽（次氯酸）分析試劑盒，在100 µL反應(yīng)體積中可檢測(cè)到低至0.4 µM次氯酸鹽。與次氯酸鹽（次氯酸鹽）選擇性反應(yīng)后，弱熒光的Oxirite™次氯酸鹽傳感器會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)熒光的產(chǎn)品，可提供超過100倍的熒光增強(qiáng)。熒光信號(hào)可以通過熒光酶標(biāo)儀讀取。使用該熒光次氯酸鹽（次氯酸）分析試劑盒，在100 µL反應(yīng)體積中可檢測(cè)到低至0.4 µM次氯酸鹽。

1. 準(zhǔn)備次氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)液或測(cè)試樣品（50 µL）
2. 添加次氯酸鹽工作溶液（50 µL）
3. 在室溫下孵育10-30分鐘
4. 監(jiān)測(cè)Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的熒光強(qiáng)度

重要說明
為了獲得*效果，強(qiáng)烈建議使用黑色印版。開始實(shí)驗(yàn)前，在室溫下解凍每個(gè)試劑盒成分的小瓶。

儲(chǔ)備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1. Oxirite™次氯酸鹽傳感器儲(chǔ)備溶液（200X）：
將50 µL DMSO（組分D）添加到Oxirite™次氯酸鹽傳感器（組分A）小瓶中，制成200X儲(chǔ)備溶液。避光。

配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

為了方便起見，請(qǐng)使用我們的系列稀釋計(jì)

將50 µL次氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)液（組分C）添加到450 µL測(cè)定緩沖液（組分B）中，得到100 mM次氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液（H7）。取100 mM（H7）次氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液，并在測(cè)定緩沖液（組分B）中進(jìn)行1:10系列稀釋，以得到10、1、0.1和0.01 mM系列次氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品（H6-H3）。然后，加入0.01 mM次氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)液（H3），并在測(cè)定緩沖液（B組份）中以1：3的比例進(jìn)行稀釋，得到0.003和0.001 mM的次氯酸鹽稀釋液標(biāo)準(zhǔn)液（H2-H1）。 

準(zhǔn)備工作溶液

將25 µL 200X Oxirite™次氯酸鹽傳感器儲(chǔ)備溶液添加到5 mL的測(cè)定緩沖液（組分B）中，并充分混合以制成次氯酸鹽工作溶液。注意：這種次氯酸鹽工作溶液足以用于一個(gè)96孔板。它不穩(wěn)定，請(qǐng)及時(shí)使用。

程序

表1.  96孔黑色實(shí)心微孔板中次氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣品的布局。H =次氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品（H1-H7，0.001至100 mM），BL =空白對(duì)照，TS =測(cè)試樣品。 

表2.  每個(gè)孔的試劑組成。

1. 根據(jù)表1和2中提供的布局，準(zhǔn)備次氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品（H），空白對(duì)照（BL）和測(cè)試樣品（TS）。對(duì)于384孔板，每孔使用25 µL試劑代替50 µL。
    
2. 將50 µL次氯酸鹽工作溶液添加到次氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品，空白對(duì)照和測(cè)試樣品的每個(gè)孔中，以使次氯酸鹽總測(cè)定體積為100 µL /孔。對(duì)于384孔板，請(qǐng)向每個(gè)孔中添加25 µL次氯酸鹽工作溶液，總體積為50 µL /孔。
    
3. 在避光條件下，于室溫下孵育反應(yīng)10-30分鐘。
    
4. 使用熒光板讀數(shù)器在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）處監(jiān)控?zé)晒獾脑黾印?/li>

數(shù)據(jù)分析

4.0e+33.0e+32.0e+3100010001001010.1- Data 1Data legendGenerated with Quest Graph™Hypochlorite (uM)RFU (540/590nm)Hover mouse to interact

從空白標(biāo)準(zhǔn)孔獲得的讀數(shù)（RFU（540 / 590nm））用作陰性對(duì)照。從其他標(biāo)準(zhǔn)的讀數(shù)中減去該值即可得到基線校正值。然后，繪制標(biāo)準(zhǔn)讀數(shù)，以獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線和方程式。該方程式可用于計(jì)算次氯酸鹽樣品。