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豬血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒

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更新時間:2017-06-14 13:44:57瀏覽次數(shù):630次

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豬血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒的基本原理就是將抗原抗體固定到特定的載體上進行反應,并通過酶催化底物發(fā)生化學變化將抗原抗體反應通過顏色的形式顯現(xiàn)出來。

1)將抗原抗體反應固相化:即試驗中的包被環(huán)節(jié),使抗原或抗體吸附于固相載體表面。其機制可能是聚苯乙烯表面間的疏水基團可以無選擇性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不破壞蛋白分子結(jié)構(gòu),保持其生物學特性和免疫學活性;

2)封閉:固相吸附蛋白是非特異性的,在包被目的免疫蛋白后,未吸附蛋白的固相表面仍然有吸附其它蛋白的能力,為了保障抗原抗體反應的特異性,因此,包被剩余的固相表面應該用抗原抗體反應無關(guān)蛋白封閉。一般認為牛血清白蛋白是zui為理想的封閉劑,也可用脫脂奶粉、明膠、牛血清替代。

3)抗原抗體反應:抗原或抗體在適當?shù)慕橘|(zhì)下可進行特異的抗原抗體反應。 4)酶反應:酶可以通過共價鍵與抗原或抗體連接形成結(jié)合物,當抗原抗體反應的時候,被檢測靶目標中也結(jié)合了酶分子。

5ELISA試劑盒底物反應:結(jié)合在抗原抗體中的酶分子,可以促使底物發(fā)生顏色反應,檢測人員可以裸眼觀察,可以通過顏色來判定是否有免疫反應的存在,通過顏色的深淺判斷標本中相應抗原或抗體的含量,也可借用酶標儀在適當?shù)牟ㄩL讀取吸光度值。

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標本/陰性對照比值

豬血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒KIT在實驗條件(包括)較難保證恒定的情況下,這種判斷法較為合適。在得出標本(S)和陰性對照(N)的A值后,計算S/N值。也有寫作P/N的,這里的P不代表陽性(positive),而是病人(patient)的縮寫,不應誤解。為避免混淆,更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA中,有些作者定出S/N為陽性標準,現(xiàn)多為各種測定所沿用。實際上每一測定系統(tǒng)應該用實驗求出各自的S/N的閾值。更應注意的是,N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的盒中所設(shè)陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液,以致反應后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。因此,這類盒規(guī),如N<0.05(或其他數(shù)值),則按0.05計算,否則將出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

 

定量測定

ELSIA操作步驟復雜,影響反應因素較多,特別是固相載體的包被難達到各個體之間的*,因此在定量測定中,每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA,豬血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒KIT標準曲線的范圍一般較寬,曲線zui高點的吸光度可接近2.0,繪制時常用半對數(shù)紙,以檢測物的濃度為橫坐標,以吸光度為縱坐標,將各濃度的值逐點連接,所得曲線一般呈S形,其頭、尾部曲線趨于平坦,*較呈直線的部分是的檢測區(qū)域。

豬血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA試劑盒

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