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人腎小球系膜細(xì)胞 HMC

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更新時(shí)間:2015-11-20 16:04:56瀏覽次數(shù):414次

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人腎小球系膜細(xì)胞 HMC齊一生物科技(上海)有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品的大型化學(xué)科技公司.齊一生物科技(上海)有限公司:.Web:www.qiyibio.com

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人腎小球系膜細(xì)胞 HMC細(xì)胞培養(yǎng)方法 
1、收到細(xì)胞,請(qǐng)查看瓶子是否有破裂,培養(yǎng)基是否漏出,是否渾濁,如有請(qǐng)盡快。
2、收到細(xì)胞,如包裝完好,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運(yùn)輸過(guò)程中的問(wèn)題,細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來(lái),顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況,出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí),請(qǐng)不要打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時(shí)左右,讓細(xì)胞先穩(wěn)定下,再于顯微鏡下觀察,此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁,請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請(qǐng)按懸浮細(xì)胞的方法處理
3. 收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況 ,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過(guò)80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出,留下 5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng):超過(guò)80%匯合度時(shí),請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液,1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
4,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過(guò)的瓶子里,存放于4℃冰箱,以備不時(shí)之需。
5 、24小時(shí)后,細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁,就可以傳代了。(貼壁細(xì)胞)將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去,加3-5ml(以能覆蓋細(xì)胞生長(zhǎng)面為準(zhǔn))PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml  0.25%含EDTA的胰酶消化,消化時(shí)間以具體細(xì)胞為準(zhǔn),一般1-3分鐘,不超過(guò)5分鐘。可以放入37℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動(dòng)瓶壁,見(jiàn)細(xì)胞脫落下來(lái),加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心,1000rpm/5min。棄上清,視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù),一般一傳二,如細(xì)胞量多可一傳三,有些細(xì)胞不易傳得過(guò)稀,有些生長(zhǎng)較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶,以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。(懸浮細(xì)胞)用移液管輕輕吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。
6,貼壁細(xì)胞 ,懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無(wú)菌操作。換液時(shí),換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液,37度    5%CO2 培養(yǎng)
7.  收到細(xì)胞后,請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞,用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)離心收集細(xì)胞,接種到一個(gè)新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液,使用新鮮配制的培養(yǎng)基,使用進(jìn)口胎牛血清. 剛接到細(xì)胞,若細(xì)胞不多時(shí) 血清濃度可以加到15%去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右 ,血清濃度還是在10%。
培養(yǎng)基參考
500ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基(含:必需與非必需氨基酸、維他命、有機(jī)與無(wú)機(jī)成分、激素、生長(zhǎng)因子與微量元素)、細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑、抗生素/抗菌素溶液或青霉素/鏈霉素(P/S)溶液、FBS,適合在飽和濕度為5%CO2與95%空氣的培養(yǎng)箱中使用
美國(guó)ATCC簡(jiǎn)介:美國(guó)菌種保藏中心, 又稱美國(guó)模式菌種收集中心(ATCC),是位于馬里蘭洲洛克菲勒的一家私營(yíng)的,非贏利性組織。目前它可以提供各種動(dòng)植物細(xì)胞、標(biāo)準(zhǔn)品、菌株達(dá)兩萬(wàn)多種。ATCC成立于1925年,是世界上zui大的生物資源中心,由美國(guó)14家生化、醫(yī)學(xué)類行業(yè)協(xié)會(huì)組成的理事會(huì)負(fù)責(zé)管理,是一家性、非盈利生物標(biāo)準(zhǔn)品資源中心。ATCC向發(fā)布其獲取、鑒定、保存及開發(fā)的生物標(biāo)準(zhǔn)品,推動(dòng)科學(xué)研究的驗(yàn)證、應(yīng)用及進(jìn)步 ATCC可以提供以下類別生物標(biāo)準(zhǔn)品:細(xì)胞株(3000多種);菌株(15000多種);動(dòng)植物病毒株(2500多種)以及重組物質(zhì)等。

現(xiàn)已成為可信賴的活體微生物、細(xì)胞系等獲得、保存和發(fā)放的國(guó)家資源中心。ATCC有29,000多種不同品系可靠的動(dòng)物細(xì)胞和微生物培養(yǎng)體,它能滿足各科學(xué)團(tuán)體對(duì)可信賴品系的需要。僅1981年就有39,000多培養(yǎng)物發(fā)放給*的科學(xué)工作者,并成功地用冷凍和冷凍干燥的方法保存各種細(xì)胞品系。 ATCC是一個(gè)非(學(xué)會(huì)單位)無(wú)利潤(rùn)的公司,由各科學(xué)組織推選成員組成理事會(huì)進(jìn)行管理。現(xiàn)有工作人員125人。參加的科學(xué)團(tuán)體有:美國(guó)免疫協(xié)會(huì)、美國(guó)生物化學(xué)會(huì)、美國(guó)細(xì)胞生物學(xué)會(huì)、美國(guó)微生物學(xué)會(huì)、美國(guó)動(dòng)物學(xué)會(huì)、美國(guó)遺傳學(xué)會(huì)、原生動(dòng)物學(xué)會(huì)和組織培養(yǎng)協(xié)會(huì)等16個(gè)學(xué)術(shù)組織。在ATCC可利用各種材料以及工具和設(shè)備進(jìn)行廣泛的研究。主要研究項(xiàng)目有:酶聯(lián)免疫吸附分析技術(shù)(ELISA),真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄的調(diào)控,雜交瘤、淋巴類和髓類以及其他細(xì)胞系的建立,人突變細(xì)胞系的基因蛋白質(zhì),借助計(jì)算機(jī)進(jìn)行鑒別分析,培養(yǎng)物的特征鑒別和保存技術(shù)的改進(jìn),關(guān)于化學(xué)致癌、致畸和致突變的。

大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子B(VEGF-B)ELISA 試劑盒
大鼠白介素12(IL-12/P40)ELISA 試劑盒
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大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA 試劑盒
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大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1(VEGFR-1/Flt1)ELISA 試劑盒
大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)ELISA 試劑盒 
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大鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL) ELISA 試劑盒 
大鼠凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA 試劑盒
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大鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA 試劑盒 
大鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)ELISA 試劑盒
大鼠內(nèi)分泌腺來(lái)源的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)ELISA 試劑盒
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大鼠可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)酶聯(lián)免疫分析大鼠可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)酶聯(lián)免疫分析體(sEPCR)ELISA 試劑盒
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大鼠大內(nèi)皮素(Big ET)ELISA 試劑盒
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大鼠遲現(xiàn)抗原(VLA)ELISA 試劑盒
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大鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA 試劑盒
大鼠促甲狀腺素(TSH)ELISA 試劑盒 
大鼠脫氫表雄酮硫酸酯(DHEA-S)ELISA 試劑盒
Phenyl Sefinose 6 Fast Flow (low sub,LS) 標(biāo)準(zhǔn)載量苯基疏水色譜柱料
Phenyl Sefinose 6 Fast Flow (high sub,HS) 高載量苯基疏水色譜柱料
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Blue SefinoseTM 6 Fast Flow 蘭色色譜柱料
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Protein G SefinoseTM Resin (Settled Resin)
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NHS-activated SefinoseTM 4 Fast Flow
SG-Arginine-C?
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SG-Chymotrypsin?
SG-Glutamic-C?
SG-Lysine-C?
SATA
Protein Stains L無(wú)毒型蛋白質(zhì)快速染色試劑盒
BCA Protein Assay KitBCA蛋白質(zhì)定量檢測(cè)試劑盒
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Bradford Protein Assay KitBradford 蛋白質(zhì)定量檢測(cè)試劑盒
Modified Bradford Protein Assay Kit改良型Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒
Modified BCA Protein Assay Kit 改良型BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒
Micro BCA Protein Assay KitBCA法微量蛋白濃度測(cè)定試劑盒
Non-Interference Protein Assay Kit非干擾型蛋白濃度測(cè)定試劑盒
Lowry Protein Assay Kit福林酚蛋白濃度測(cè)定試劑盒
Lowry Protein Assay Kit福林酚蛋白濃度測(cè)定試劑盒
Modified Lowry Protein Assay Kit 改良型Lowry法蛋白濃度測(cè)定試劑盒
Stable Lowry Protein Assay Kit 穩(wěn)定型Lowry法蛋白濃度測(cè)定試劑盒
BSA牛血清白蛋白溶液
Triton X-405
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Folin-Phenol Reagent 福林酚蛋白濃度測(cè)定試劑
Sulfo-NHS-Biotin
Sulfo NHS LC Biotin
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Sulfo NHS
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Iodination Reagent
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Traut's Reagent
Western-Blot-Re-Probe SolutionWestern Blots---印跡膜再生液

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