脂肪酸合成酶(FAS)測試盒_分光光度法
測定方法:分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:10管/9樣
注 意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
FAS是脂肪酸合成關(guān)鍵酶,催化乙酰和丙二酰而生成長鏈脂肪酸。FAS普遍表達(dá)于各種組織細(xì)胞中,在哺乳動物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達(dá)豐富。
脂肪酸合成酶(FAS)測試盒_分光光度法
測定原理:
FAS催化乙酰CoA、丙二酰CoA和NADPH生成長鏈脂肪酸和NADP+;NADPH在340nm有吸收峰,而NADP+沒有;通過測定340nm 光吸收下降速率,計算FAS活性。
自備儀器和用品:
研缽、冰、臺式離心機(jī)、紫外分光光度計、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體10mL×1瓶,-20℃保存。用前取出置于4℃充分解凍后混勻。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入275 μL試劑四,充分溶解,用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入275 μL試劑四,充分溶解,用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑四:液體10 mL×1瓶,4℃保存。
試劑五:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入525 μL試劑四,充分溶解,用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
粗酶液提取:
1.組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。12000g,4℃離心40min,取上清置冰上待測。
2.細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后12000g,4℃,離心40min,取上清置于冰上待測。
3.血清等液體:直接測定。