在通用ELISA試劑盒測(cè)定中試劑的準(zhǔn)備zui為關(guān)鍵的是，在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái)，在室溫下放置20min以上后，再進(jìn)行測(cè)定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的，主要是為了在后面，能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所要求的高度，以滿足測(cè)定要求。

操作步驟如下：

(1)將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌。
(2) 待測(cè)管中加受檢標(biāo)本和一定量酶標(biāo)抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應(yīng)。如受檢標(biāo)本中無(wú)抗原，則酶標(biāo)抗原能順利地與固相抗體結(jié)合。如受檢標(biāo)本中含有抗原，則 與酶標(biāo)抗原以同樣的機(jī)會(huì)與固相抗體結(jié)合，競(jìng)爭(zhēng)性地占去了酶標(biāo)抗原與固相載體結(jié)合的機(jī)會(huì)，使酶標(biāo)抗原與固相載體的結(jié)合量減少。參考管中只加酶標(biāo)抗原，保溫 后，酶標(biāo)抗原與固相抗體的結(jié)合可達(dá)zui充分的量。洗滌。
(3)加底物顯色：參考管中由于結(jié)合的酶標(biāo)抗原zui多，故顏色zui深。參考管顏色深度與待測(cè)管顏色深度之差，代表受檢標(biāo)本抗原的量。待測(cè)管顏色越淡，表示標(biāo)本中抗原含量越多。
通用ELISA試劑盒間接法、競(jìng)爭(zhēng)法、捕獲法，應(yīng)用親和素和*的ELISA親 和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每個(gè)分子由4個(gè)亞基組成，可以和4個(gè)*分子親密結(jié)合。現(xiàn)在使用更多的是從鏈霉菌中提取的鏈霉親和 素。*又稱維生素H，分子量244.31，存在于蛋黃中。用化學(xué)方法制成的衍生物，*-羥 基琥珀亞胺酯(BNHS)可與蛋白質(zhì)、糖類和酶等多種類型的大小分子形成*化的產(chǎn)物。親和素與*的結(jié)合，雖不屬免疫反應(yīng)，通用ELISA試劑盒但特異性強(qiáng)，親和力大， 兩者一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定。由于1個(gè)親和素分子有4個(gè)*分子的結(jié)合位置，可以連接更多的*化的分子，形成一種類似晶格的復(fù)合體。因此把親和素和生物 素與ELISA偶聯(lián)起來(lái)，就可大大提高ELISA的敏感度。