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公司是*的ATCC細(xì)胞供應(yīng)商，提供人胚肺成纖維細(xì)胞；MRC-5的報(bào)價(jià)，咨詢，稱技術(shù)服務(wù)，咨詢選購。
細(xì)胞名稱  人胚肺成纖維細(xì)胞；MRC-5  
形態(tài)特性   成纖維細(xì)胞樣　  
生長特性  貼壁生長　  
特征特性   該細(xì)胞系來自14周齡男性胎兒的正常肺組織。由 Jacobs JP于1966年建立。    
培養(yǎng)條件   M-199: with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS)   10%FBS  
傳代方法   1:2傳代；3-4天一次  
傳代情況  PN15  
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　  
支原體檢測(cè)  熒光法（-）　  
STR   Amelogenin：XY；D8S1179：13；D21S11：31.2；D7S820：10,11；CSF1PO：11,12；D3S1358：15,17；TH01：8；D13S317：11, 14；D16S539：9, 11；D2S1338：20；D19S433：14,15；vWA：15；THOX：8；D18S51：15,21；D5S818：11, 12；FGA：21,23。  
同工酶    
染色體    
使用權(quán)限  A類培養(yǎng)需要滿足以下條件
1、無菌、無毒的環(huán)境：首先應(yīng)保證被培養(yǎng)的細(xì)胞處于無菌、無毒的環(huán)境，即對(duì)培養(yǎng)液和所有的培養(yǎng)用具進(jìn)行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素以防培養(yǎng)過程中的污染。

2、營養(yǎng)物質(zhì)：細(xì)胞體外培養(yǎng)所需營養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同，需要有葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等。通常還需加入血清、血漿等一些天然成分。

3、溫度和pH：細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度一般與動(dòng)物的體溫相近。多數(shù)細(xì)胞生存的適宜pH為7.2～7.4。

4、氣體環(huán)境：培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2，O2是細(xì)胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，將其置于含95%空氣加5% CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
外基質(zhì)，參與系膜基質(zhì)及腎小球基底膜的修復(fù)與更新，在腎小球生理功能和病理反應(yīng)中起著重要作用。  
細(xì)胞特性  
1)組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常腎組織。  
2)細(xì)胞鑒定：結(jié)蛋白（Desmin）免疫熒光染色為陽性。  
3)鑒定細(xì)胞純度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。  
5)細(xì)胞生長方式：長梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。  
腎小球內(nèi)皮細(xì)胞  
細(xì)胞詳述  
腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團(tuán)毛細(xì)血叢。在腎小球內(nèi)，微血管受到高壓，而加速了超濾作用的進(jìn)行。腎小球過濾膜從內(nèi)到外有三層：內(nèi)層、中層和外層。其中，內(nèi)層為內(nèi)皮細(xì)胞層，附著在腎小球基底膜內(nèi)。  
細(xì)胞特性  
1)組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常腎組織。  
2)細(xì)胞鑒定：Ⅷ子相關(guān)抗原（Factor Ⅷ）免疫熒光染色為陽性。  
3)鑒定細(xì)胞純度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。  
5)細(xì)胞生長方式：圓形，多角形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。  
腎小球足細(xì)胞  
細(xì)胞詳述  
腎小球?yàn)檠哼^濾器，腎小球毛細(xì)血管壁構(gòu)成過濾膜。腎小球過濾膜從內(nèi)到外有三層結(jié)構(gòu)：內(nèi)層為內(nèi)皮、中層為腎小球基膜、外層為上皮細(xì)胞層，上皮細(xì)胞又稱足細(xì)胞，其不規(guī)則突起稱足突，其間有許多狹小間隙，血液濾膜過濾后，濾液入腎小球囊。在正常情況下，血液中絕大部分蛋白質(zhì)不能濾過而保留于血液中，僅小分子物質(zhì)如尿素、葡萄糖、電解質(zhì)及某些小分子蛋白能濾過。  
腎足細(xì)胞即腎小球上皮細(xì)胞，它附著于腎小球基底膜的外側(cè)，連同腎小球基底膜和腎小球基膜一起構(gòu)成了腎小球血液濾過屏障。又由于正常成年機(jī)體的腎臟足細(xì)胞是一種終末分化細(xì)胞，體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞不能增殖。  
足細(xì)胞呈星型多突狀，胞體較大，由胞體伸出許多突起，呈指狀交叉覆蓋于腎小球基底膜外表面，并通過黏附分子和蛋白多糖分子與腎小球基底膜相連。足細(xì)胞在正常情況下可以分泌腎小球基底膜的主要組成成分I型膠原和纖維連接蛋白,在促腎纖維化引資等刺激下還能分泌具有降解腎小球基底膜作用的基質(zhì)金屬蛋白酶和組織蛋白酶，從而在腎小球基底膜的代謝平衡中發(fā)揮重要作用。  
細(xì)胞特性  
1)細(xì)胞來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物正常腎臟組織。  
2)細(xì)胞鑒定：廣譜角蛋白（PCK）或WT-1（Wilm'sTumorProtein）免疫熒光染色為陽性。  
3)鑒定細(xì)胞純度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。  
5)細(xì)胞生長方式：不規(guī)則，含足突細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。  
輸尿管上皮細(xì)胞  
細(xì)胞詳述  
輸尿管位于腹膜后，為一肌肉粘膜所組成管狀結(jié)構(gòu)，上起自腎盂，下終止于膀胱三角。輸尿管管壁分為4層：黏膜表面、固有層、輸尿管肌層和外膜。其中，黏膜表面為移行上皮。尿路上皮的研究是泌尿外科領(lǐng)域研究的熱門，其中有尿路上皮腫瘤研究、輸尿管損傷研究等。此，體外培養(yǎng)輸尿管上皮細(xì)胞是輸尿管生物學(xué)研究的基礎(chǔ)和前提。  
細(xì)胞特性  
1)組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常輸尿管組織。  
2)細(xì)胞鑒定：廣譜角蛋白(PCK)免疫熒光染色為陽性。  
3)鑒定細(xì)胞純度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。  
5)細(xì)胞生長方式：鋪路石狀細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。  
輸尿管平滑肌細(xì)胞  
細(xì)胞詳述  
輸尿管位于腹膜后，為一肌肉粘膜所組成管狀結(jié)構(gòu)，上起自腎盂，下終止于膀胱三角。輸尿管管壁分為4層：黏膜表面、固有層、輸尿管肌層和外膜。其中，肌層主要由內(nèi)縱和外環(huán)兩層平滑肌組成。  
細(xì)胞特性  
1)組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常輸尿管組織。  
2)細(xì)胞鑒定：平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）免疫熒光染色為陽性。  
3)鑒定細(xì)胞純度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。  
5)細(xì)胞生長方式：長梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。  
膀胱上皮細(xì)胞  
細(xì)胞詳述  
膀胱壁由三層組織組成，由內(nèi)外為粘膜層、肌層和外膜。其中，粘膜層為極薄的一層移行上皮組織，和輸尿管及尿道黏膜彼此連貫。體外培養(yǎng)膀胱上皮細(xì)胞不僅為組織工程膀胱，尿道提供種植細(xì)胞的必要手段，也是研究移行上皮細(xì)胞腫瘤發(fā)生和治療的基礎(chǔ)與前提。  
細(xì)胞特性  
1)組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常膀胱組織。  
2)細(xì)胞鑒定：廣譜角蛋白(PCK)免疫熒光染色為陽性。  
3)鑒定細(xì)胞純度高于90%。  
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。  
5)細(xì)胞生長方式：鋪路石狀細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。