上海莼試生物技術(shù)有限公司
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更新時間:2017-06-06 10:21:31瀏覽次數(shù):279
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細胞名稱 人胚腎二倍體細胞;HEK-2
形態(tài)特性 上皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞系來自一女性胎兒的正常腎組織。昆明細胞庫于1986年建立。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:2傳代;3-4天一次
傳代情況 P4
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類人胚腎二倍體細胞;HEK-2
實驗方法和步驟
(一) 前處理 用臺稱稱量青蛙或蟾蜍的體重,然后按10微克/克動物體重的劑量,腹腔注射秋水仙素。
(二) 取材 注射4小時后,將動物處死,用剪刀剪開皮膚和肌肉,取出大腿骨和脛骨,剔凈股骨上的肌肉,然后用一小塊紗布來回搓干凈。剪開兩端股骨,用注射器(內(nèi)裝5ml 1% 檸檬酸鈉溶液)緩慢沖洗骨髓細胞到離心管中,經(jīng)平衡后離心8分鐘,速度為1000轉(zhuǎn)/分鐘。
(三) 低滲 吸去上清液,留沉淀物0.2ml,加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度,用吸管沖勻沉淀物,在恒溫水浴(28℃)處理20分鐘或更長一點時間。
(四) 固定 低滲后,以每分鐘1000轉(zhuǎn)速度離心10分鐘。用吸管小心吸去上清液,留0.2ml沉淀物,沖散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。 沖勻后靜止固定20分鐘。重復(fù)固定1~2次,離心的速度與時間以上述相同。
(五) 滴片 吸去上清液,留0.2ml沉淀物,加4滴新配的固定液,沖勻沉淀物。從冰箱取出預(yù)先冷凍的載片,每片滴3滴細胞懸液,立即用嘴向載片上吹氣,使細胞均勻分散,在酒精燈火焰上來回烤一下,以助染色體更好分散和展開。 (六) 染色 用10:1 Giemsa染液染色20分鐘(Giemsa原液用PH=6.8磷酸緩沖液稀釋),然后用水沖洗,片干后鏡檢。 (七) 鏡檢 在中倍鏡下找染色體分散好的中期分裂相,轉(zhuǎn)至高倍鏡詳細觀察兩棲類染色體的數(shù)目,屬于大、中、小染色體各有多少條。
注意事項:
1.收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們。
2.收到細胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(視細胞密度而定)穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收細胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。
3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?,故本公司只保證客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài),故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
細胞詳述
胰島細胞分泌胰高血糖素,與胰島素一起發(fā)揮作用來發(fā)揮調(diào)節(jié)血糖的水平。胰島根據(jù)其分泌激素的功能可分為:β細胞、α細胞、δ細胞、胰島PP細胞。體外培養(yǎng)胰島細胞為胰島移植、胰島素分泌機制和降糖藥物作用機制等研究提供了前提和基礎(chǔ)。
細胞特性
1)組織來源于實驗動物的正常胰腺組織。
2)細胞鑒定:雙硫腙(DTZ)化學(xué)染色染色為陽性。
3)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:島狀成團生長,貼壁培養(yǎng)。
胰島β細胞
細胞詳述
胰島細胞分泌胰高血糖素,與胰島素一起發(fā)揮作用來發(fā)揮調(diào)節(jié)血糖的水平。胰島根據(jù)其分泌激素的功能可分為:β細胞、α細胞、δ細胞、胰島PP細胞。其中,能分泌胰島素,與胰島A細胞分泌的胰高血糖素一起起到調(diào)節(jié)血糖的作用。胰島β細胞功能受損、胰島素分泌或相對不足(胰島素抵抗),會使血糖升高,從而引發(fā)糖尿病。而胰島β細胞癌變會生成胰島素瘤,引起惡性血糖降低癥狀。
細胞特性
1)組織來源于實驗動物的正常胰腺組織。
2)細胞鑒定:胰島素(Insulin)免疫熒光染色為陽性。
3)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:上皮樣,多角形細胞,貼壁培養(yǎng)。
垂體細胞
細胞詳述
垂體是機體的重要的內(nèi)分泌腺體,由生長激素和促腎上腺皮質(zhì)激素細胞等細胞構(gòu)成,在機體的生長發(fā)育、生命活動、內(nèi)分泌調(diào)節(jié)以及衰老死亡過程中起著重要意義。此,垂體細胞的體外培養(yǎng)為進一步研究垂體與
生殖的神內(nèi)分泌調(diào)節(jié)機制及垂體移植研究等方面提供了基礎(chǔ)和前提。
細胞特性
1)組織來源于實驗動物的正常垂體組織。
2)細胞鑒定:LH、FSH與PRL免疫熒光染色為陽性。
3)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HI-1、 HB、HC、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:梭形或多角形細胞,不規(guī)則細胞,貼壁培養(yǎng)。
胸腺細胞
細胞詳述
胸腺作為哺乳動物的中樞免疫器官,不僅是T淋巴細胞分化、發(fā)育、成熟,同時向外周T細胞庫輸出T淋巴細胞的場所。胸腺細胞密集于皮質(zhì)內(nèi),其表達自身抗原